反义Cortactin基因能抑制肝癌细胞转移
本报陕西讯 第四军医大学西京医院肝胆外科许朱定博士等在导师窦科峰教授的指导下，开展的“反义皮层肌动蛋白基因对肝癌细胞功能影响的研究”日前结题。该研究证明，反义皮层肌动蛋白(Cortactin)基因有抑制肝癌细胞转移的功能，从而为将该基因用作治疗肝癌细胞转移的靶基因提供了依据。
肝细胞肝癌(HCC)是最常见的恶性肿瘤之一，尽管诊断和治疗技术取得了很大的进步，但3年、5年的生存率分别在35%~62%和17%~50%。而限制肝癌病人长期生存的主要原因是肝癌的转移和复发。研究表明，恶性肿瘤较高的迁移运动能力是其发生侵袭转移的重要原因之一，而皮层肌动蛋白参与肌动蛋白细胞骨架的调控。
为了将反义Cortactin基因转移入人肝癌细胞中，观察其表达效果及对细胞本身的影响，以及该基因在肝癌细胞转移中的作用，许朱定等用Trizol试剂法提取体外培养的人肝癌高转移细胞株MHCC97总RNA，经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增目的片段，PCR产物及真核表达载体分别双酶切后进行连接，并转化入大肠杆菌Ecoli.dh5α扩增以获得重组质粒，并将重组质粒、空质粒分别转染入人高转移肝癌细胞株进行扩增培养，分别绘制MHCC97/veet-cortactin(+)MHCC97/veet和MHCC97细胞生长曲线，且进行Western-blot实验及通过小室培养模型进行细胞侵袭力实验。
结果显示，RT-PCR获得预期大小的特异性DNA片段；经PCR、双酶切鉴定及测序证实，人Cortactin基因cDNA片段已正确地反向插入真核表达载体中；细胞生长曲线提示，转染和未转染该基因的肝癌细胞生长曲线相同；Western-blot实验结果显示，转染反义基因的肝癌细胞Cortactin呈低表达或不表达；细胞侵袭力实验表明，转染有反义基因的肝癌细胞穿膜细胞数与未转染的有非常显著性差异(P, http://www.100md.com(张中桥)
肝细胞肝癌(HCC)是最常见的恶性肿瘤之一，尽管诊断和治疗技术取得了很大的进步，但3年、5年的生存率分别在35%~62%和17%~50%。而限制肝癌病人长期生存的主要原因是肝癌的转移和复发。研究表明，恶性肿瘤较高的迁移运动能力是其发生侵袭转移的重要原因之一，而皮层肌动蛋白参与肌动蛋白细胞骨架的调控。
为了将反义Cortactin基因转移入人肝癌细胞中，观察其表达效果及对细胞本身的影响，以及该基因在肝癌细胞转移中的作用，许朱定等用Trizol试剂法提取体外培养的人肝癌高转移细胞株MHCC97总RNA，经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增目的片段，PCR产物及真核表达载体分别双酶切后进行连接，并转化入大肠杆菌Ecoli.dh5α扩增以获得重组质粒，并将重组质粒、空质粒分别转染入人高转移肝癌细胞株进行扩增培养，分别绘制MHCC97/veet-cortactin(+)MHCC97/veet和MHCC97细胞生长曲线，且进行Western-blot实验及通过小室培养模型进行细胞侵袭力实验。
结果显示，RT-PCR获得预期大小的特异性DNA片段；经PCR、双酶切鉴定及测序证实，人Cortactin基因cDNA片段已正确地反向插入真核表达载体中；细胞生长曲线提示，转染和未转染该基因的肝癌细胞生长曲线相同；Western-blot实验结果显示，转染反义基因的肝癌细胞Cortactin呈低表达或不表达；细胞侵袭力实验表明，转染有反义基因的肝癌细胞穿膜细胞数与未转染的有非常显著性差异(P, http://www.100md.com(张中桥)