中国小型猪骨髓间充质干细胞的蛋白质组研究
骨髓间充质干细胞,蛋白质组,二维电泳,质谱,,骨髓间充质干细胞，蛋白质组，二维电泳，质谱,1引言,2实验部分,3结果与讨论
摘要 报道了骨髓间充质干细胞(MSCs)的蛋白质组表达研究。从体外培养的MSCs提取细胞蛋白，经二维电泳分离后用银染方法可检出蛋白点约1600个，选取48个蛋白点进行胶内酶解及质谱分析，经数据库检索成功鉴定了37个蛋白，并对蛋白功能进行初步分析。本实验数据为进一步分析MSCs增殖、分化或凋亡的分子机理提供相关信息。关键词 骨髓间充质干细胞，蛋白质组，二维电泳，质谱
1 引言
骨髓间充质干细胞(MSCs)是一种具有多向分化潜能的成体组织干细胞[1]，在特定的条件下可以分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞和神经细胞。在体外将MSCs定向诱导分化成预期的目标细胞，对相应的损伤组织或器官进行细胞移植治疗具有十分重要的临床应用价值。但是由于MSCs的分化机理仍不十分清楚，所以限制了MSCs的应用。因此，有必要对MSCs的分化机理及影响分化过程的各种因子进行深入的研究，从而通过调节各种生长因子的表达来控制MSCs分化途径。蛋白质作为生命活动的主体，在干细胞分化过程中起着十分重要的作用。对细胞生理活动中蛋白表达情况进行分析，将有助于对干细胞活动分子机理的认识，同时也为进一步人工干预干细胞定向分化提供科学依据。蛋白质组学研究作为后基因组学时代生命科学研究的重要工具，在组织[2]、细胞株[3]等蛋白表达中有着广泛的应用。对MSCs蛋白质组进行表达研究是相关MSCs蛋白质组学研究的第一步。实验采用二维电泳/质谱方法对MSCs蛋白质组进行初步表达研究，为进一步研究MSCs增殖、分化和凋亡提供科学数据。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
低温超速离心机(德国Hettich公司);二维电泳仪、PDQuest凝胶分析软件(7.1版，美国BioRad公司)；Powerlook 2100XL 凝胶图像扫描仪(美国Umax公司)；MALDITOFMS (德国Bruker公司)。固相pH梯度干胶条(17 cm，线性梯度)、两性电解质溶液(pH 5～8)、矿物油、碘乙酰胺购自Biorad公司；丙烯酰胺、二硫苏糖醇(DTT)、TEMED、考马斯亮蓝(G250)、3[(3胆酰胺丙基)二乙胺]丙磺酸(CHAPS)、硝酸银、低熔点琼脂糖、过硫酸铵(APS)、苯***** (PMSF)、Tris、甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、尿素、十二烷基磺酸钠(SDS)、溴酚蓝购自Promega公司；胰蛋白酶、甘油、无水碳酸钠、硫代硫酸钠、三氟乙酸(TFA)购自Sigma公司；甲醇、乙醇、冰醋酸为国产分析纯产品；实验用水为MilliQ水 ......
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