Ce(Ⅳ)连二亚硫酸钠左炔诺孕酮化学发光体系的研究
1 引言
左炔诺孕酮(levonorgestrel，LNG)是一种甾体激素避孕药。目前测定左炔诺孕酮的方法，有色谱法、荧光法、光度法及放射免疫法。这些方法有的灵敏度低，有的操作繁琐。利用流动注射化学发光分析法测定左炔诺孕酮，未见报道。本实验发现，在硝酸介质中，Ce(IV)氧化连二亚硫酸钠产生较弱的化学发光，左炔诺孕酮可以显著增强此发光。在此基础上，结合流动注射技术，建立了测定左炔诺孕酮的流动注射化学发光新方法，并用于测定片剂中左炔诺孕酮含量，结果满意。
2 实验部分
2.1 仪器和试剂 IFFMA化学数据采集分析系统(西安瑞迈电子科技有限公司)；HL2恒流泵(上海青浦沪西仪器厂)。左炔诺孕酮标准溶液5.0 mg/L：准确称取左炔诺孕酮标准品(中国药品生物制品检定所)5.0 mg，用二次水超声振荡溶解，定容至1000 mL棕色容量瓶中，摇匀，储于4℃冰箱备用。使用时用二次水稀释到所需浓度。硝酸高铈(重庆化学试剂厂)溶液0.01 mol/L(内含0.1 mol/L硫酸)；连二亚硫酸钠(重庆无机化学试剂厂)溶液0.05 mol/L。H2SO4，HCl，HNO3，H3PO4均购于重庆化学试剂厂。所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。
, 百拇医药
2.2 实验方法 分别将载流(硝酸)、Ce(Ⅳ)及Na2S2O4溶液通过相应的管道输入分析系统，待基线稳定后，注入样品溶液，记录反应的发光强度。以增加的光强定量(ΔI)。
3 结果与讨论
3.1 溶液流速对化学发光信号的影响 本装置试剂的汇合点到反应流通池之间的距离为5.0 cm。实验表明：随着流速的增大，起初化学发光信号逐渐增大，当流速大于6.0 mL/min时，化学发光信号达到了最大值，不再增大。实验流速选取为6.0 mL/min。
3.2 试剂加入顺序的影响 试剂的加入顺序对化学发光强度有极大的影响。实验表明，以酸为载流，Ce(Ⅳ)先与连二亚硫酸钠混合再与酸混合，最后注入样品的方式，可以获得较大的发光强度，基线低、稳定，而且重现性好。
3.3 介质及浓度的影响 考察了0.5 mol/L的硫酸、硝酸、盐酸和高氯酸对发光强度的影响，发现在硝酸介质中有较大的发光信号，且基线稳定。进一步实验显示，当HNO3浓度为0.3 mol/L时，发光强度最大。HNO3浓度选用0.3 mol/L。
, 百拇医药
3.4 其它试剂浓度的影响 实验表明，当连二亚硫酸钠浓度为0.3 mmol/L，Ce(Ⅳ)浓度为1.0 mmol/L时，增加的发光强度(ΔI)最大。故分别选用0.3 mmol/L和1.0 mmol/L。
3.5 线性范围、检出限及精密度 在选定的实验条件下，对左炔诺孕酮进行测定，其线性范围为8.0~5000 μg/L。为了提高测定的精密度和准确度，标准曲线分段求得。回归方程分别为：ΔI=935.52C-12.362(C=8.0~500 μg/L, r=09995), ΔI=3955C-250.5(C=500~1000 μg/L，r=0.9999), ΔI=408.5C+9.5(C=1000 ~5000 μg/L, r=0.9999)。对300 μg/L的左炔诺孕酮连续平行测定11次，其相对标准偏差为4.0%，根据IUPAC规定，计算其检出限为4.6 μg/L(3σ)。
3.6 干扰实验 对100 μg/L的左炔诺孕酮进行了干扰实验，如控制测量误差在5%以内，结果发现1000倍的Na+、NH+4、K+、Cl-、NO-3、SO2-4，100 倍的Ca2+、Zn2+、Mg2+、Pb2+、Ba2+、Cu2+、CO2-3、淀粉、葡萄糖、蔗糖、柠檬酸，50倍的Al3+、Fe3+、Cr3+、Pb2+对测定不干扰。
3.7 样品分析 取市售左炔诺孕酮片剂20片(标示量：0.75 mg/片)，准确称量后研细混匀，求得每片平均质量。然后称取相当于一片的量加二次水超声振荡溶解，定容至150 mL，摇匀，准确移取一定量该样品溶液稀释至线性范围内，然后按上述实验方法测定，根据其峰高计算左炔诺孕酮含量,并与荧光光谱分析法测得结果对比，发现化学发光法测得结果与荧光法相吻合。样品的标准加入回收率为98.4%～101.8%。
本文系重庆市教委自然科学基金资助项目(No.KJ051305)
(涪陵师范学院化学及环境科学系，重庆 408003), 百拇医药(何树华)
左炔诺孕酮(levonorgestrel，LNG)是一种甾体激素避孕药。目前测定左炔诺孕酮的方法，有色谱法、荧光法、光度法及放射免疫法。这些方法有的灵敏度低，有的操作繁琐。利用流动注射化学发光分析法测定左炔诺孕酮，未见报道。本实验发现，在硝酸介质中，Ce(IV)氧化连二亚硫酸钠产生较弱的化学发光，左炔诺孕酮可以显著增强此发光。在此基础上，结合流动注射技术，建立了测定左炔诺孕酮的流动注射化学发光新方法，并用于测定片剂中左炔诺孕酮含量，结果满意。
2 实验部分
2.1 仪器和试剂 IFFMA化学数据采集分析系统(西安瑞迈电子科技有限公司)；HL2恒流泵(上海青浦沪西仪器厂)。左炔诺孕酮标准溶液5.0 mg/L：准确称取左炔诺孕酮标准品(中国药品生物制品检定所)5.0 mg，用二次水超声振荡溶解，定容至1000 mL棕色容量瓶中，摇匀，储于4℃冰箱备用。使用时用二次水稀释到所需浓度。硝酸高铈(重庆化学试剂厂)溶液0.01 mol/L(内含0.1 mol/L硫酸)；连二亚硫酸钠(重庆无机化学试剂厂)溶液0.05 mol/L。H2SO4，HCl，HNO3，H3PO4均购于重庆化学试剂厂。所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。
, 百拇医药
2.2 实验方法 分别将载流(硝酸)、Ce(Ⅳ)及Na2S2O4溶液通过相应的管道输入分析系统，待基线稳定后，注入样品溶液，记录反应的发光强度。以增加的光强定量(ΔI)。
3 结果与讨论
3.1 溶液流速对化学发光信号的影响 本装置试剂的汇合点到反应流通池之间的距离为5.0 cm。实验表明：随着流速的增大，起初化学发光信号逐渐增大，当流速大于6.0 mL/min时，化学发光信号达到了最大值，不再增大。实验流速选取为6.0 mL/min。
3.2 试剂加入顺序的影响 试剂的加入顺序对化学发光强度有极大的影响。实验表明，以酸为载流，Ce(Ⅳ)先与连二亚硫酸钠混合再与酸混合，最后注入样品的方式，可以获得较大的发光强度，基线低、稳定，而且重现性好。
3.3 介质及浓度的影响 考察了0.5 mol/L的硫酸、硝酸、盐酸和高氯酸对发光强度的影响，发现在硝酸介质中有较大的发光信号，且基线稳定。进一步实验显示，当HNO3浓度为0.3 mol/L时，发光强度最大。HNO3浓度选用0.3 mol/L。
, 百拇医药
3.4 其它试剂浓度的影响 实验表明，当连二亚硫酸钠浓度为0.3 mmol/L，Ce(Ⅳ)浓度为1.0 mmol/L时，增加的发光强度(ΔI)最大。故分别选用0.3 mmol/L和1.0 mmol/L。
3.5 线性范围、检出限及精密度 在选定的实验条件下，对左炔诺孕酮进行测定，其线性范围为8.0~5000 μg/L。为了提高测定的精密度和准确度，标准曲线分段求得。回归方程分别为：ΔI=935.52C-12.362(C=8.0~500 μg/L, r=09995), ΔI=3955C-250.5(C=500~1000 μg/L，r=0.9999), ΔI=408.5C+9.5(C=1000 ~5000 μg/L, r=0.9999)。对300 μg/L的左炔诺孕酮连续平行测定11次，其相对标准偏差为4.0%，根据IUPAC规定，计算其检出限为4.6 μg/L(3σ)。
3.6 干扰实验 对100 μg/L的左炔诺孕酮进行了干扰实验，如控制测量误差在5%以内，结果发现1000倍的Na+、NH+4、K+、Cl-、NO-3、SO2-4，100 倍的Ca2+、Zn2+、Mg2+、Pb2+、Ba2+、Cu2+、CO2-3、淀粉、葡萄糖、蔗糖、柠檬酸，50倍的Al3+、Fe3+、Cr3+、Pb2+对测定不干扰。
3.7 样品分析 取市售左炔诺孕酮片剂20片(标示量：0.75 mg/片)，准确称量后研细混匀，求得每片平均质量。然后称取相当于一片的量加二次水超声振荡溶解，定容至150 mL，摇匀，准确移取一定量该样品溶液稀释至线性范围内，然后按上述实验方法测定，根据其峰高计算左炔诺孕酮含量,并与荧光光谱分析法测得结果对比，发现化学发光法测得结果与荧光法相吻合。样品的标准加入回收率为98.4%～101.8%。
本文系重庆市教委自然科学基金资助项目(No.KJ051305)
(涪陵师范学院化学及环境科学系，重庆 408003), 百拇医药(何树华)