增光片中五味子醇甲的含量测定
[摘要] 目的 建立反相高效液相法测定增光片中五味子醇甲含量的方法。方法 采用十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相为甲醇-乙腈-水(60∶5∶32)；检测波长为250nm。结果 五味子醇甲在0.0672～0.672μg范围内呈良好的线性关系;平均回收率为97.64%，RSD=1.21%。结论 该方法不仅操作简单、准确，且重复性好，可用于增光片的质量控制。
[关键词] 反相高效液相法；增光片；五味子醇甲；含量测定
Content determination of schizandrol A in Zengguang tablets
LIU Zhao-hui，YANG Bao-fan.
Hunan Dehai Pharmaceutical Co.Ltd.，Changde 415001，China
[Abstract] Objective To study RP-HPLC methods that determined the schizandrol A content in Zengguang tablets.Methods Schizandrol A was separated completely on an C18 column，using a mixture of methanol，acetonitrile and water(60∶5∶32)as mobile phase，with UV detection at 250nm.Results Schizandrol A has better linear correlation between 0.0672μg and 0.672μg，the results also have shown the recovery rate was 97.64%，RSD 1.21%.Conclusion The methods is very stable and accurate，and has good reappearance.It can be used for quality control of Zengguang tablets.
[Key words] RP-HPLC;Zengguang tablets;schizandrol A;content determination
增光片是由枸杞子、当归、党参、茯苓、五味子等10味中药组成的中药复方制剂。具有补益气血、滋养肝肾、明目安神、增加视力的功效，临床上用于治疗近视眼[1]。本品收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十一册，原标准中只有显微鉴别和通用的理化鉴别，无含量测定项目，为了更好地控制产品质量，本文建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定增光片中五味子醇甲的含量，抑制增光片的质量，以确保临床疗效[2～5]。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10AV紫外检测器；CT-100恒温箱。LC2002数据处理系统。上海必能信CQ-250型超声波清洗器。BP211DAG电子天平(德国Sartorius)。
1.2 试剂 甲醇为色谱醇；甲醇、天水乙醇、乙腈均为分析纯；水为重蒸水。五味子醇甲(中国药品生物制品检定所，批号：110857-200304)；增光片(湖南德海制药有限公司，批号：030426)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 (1)色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱Diamonsil(TM)C18(250×4.6mm)，5μm(迪马公司)；(2)流动相：甲醇-乙腈-水(60∶5∶32)；(3)检测波长：254nm；(4)流速：1.0ml/min；(5)柱温：40℃。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥12h的五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1ml含0.0336mg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备 取增光片20片，除去糖衣，精密称定，研细，取细粉约2g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理45min，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例称取除五味子的其他药材适量，依照增光片的制备工艺和供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2.5 线性关系的考察 分别精密吸取五味子醇甲对照品溶液(浓度0.0336mg/ml)2μl、4μl、8μl、12μl、20μl，注入液相色谱仪，测定，以五味子醇甲的进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=8E+06X+23682(r=0.9997)。结果表明五味子醇甲在0.0672～0.672μg范围内具有良好的线性关系。
2.6 精密度试验 精密吸取五味子醇甲对照品溶液(0.0336mg/ml)10μl，重复进样6次，峰面积积分值分别为2395570、2440616、2396849、2394535、2467203、2425933，RSD=1.24%。表明本方法精密度良好。
2.7 重复性试验 取同一批增光片(批号：030426)，除去糖衣，研细，取细粉5份，每份约2g，精密称定，按2.3项下的方法制备样品，进行含量测定。结果分别为0.1026mg/片、0.0999mg/片、0.0992mg/片、0.0986mg/片、0.0982mg/片，平均为0.0997mg/片，RSD为1.75%。表明本方法具有较好的重复性。
2.8 稳定性试验 取重复性试验项下试验号4的供试品溶液，每2h进样1次，每次10μl，连续进样6次，结果表明在10h内峰面积积分值基本稳定，RSD为1.58%。结果平均回收率为97.64%，RSD为1.21%。见表1。
2.9 回收率试验 贮备溶液：精密称取五味子醇甲对照品3.7mg，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1ml中含五味子醇甲0.37mg的溶液。
取已知含量(批号：030426，含量为0.0997mg/片)的增光片，除去糖衣，研细，取1.0g(6份)，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入贮备溶液0.8ml、1ml、1.2ml，置水浴上挥发至干，按供试品溶液制备方法进行制备并测定含量，计算回收率，结果平均回收率为97.64%，RSD为1.21%。见表1。
表1 回收率试验结果(略)
2.10 样品测定 按拟定的含量测定方法测定10批增光片中五味醇甲的含量，结果见表2。
表2 含量测定结果(略)
3 讨论
笔者曾对提取溶媒、提取时间进行了考察，结果以加入甲醇、超声处理45min为佳。干扰试验结果表明：五味子的阴性对照样品无干扰。方法学考察结果表明：五味子醇甲在0.0672～0.672μg范围内呈良好的线性关系；该方法精密度良好，具有较好的重复性和稳定性，平均回收率为97.64%。因此该方法可用于增光片的质量控制。根据测定的结果，并考虑到药材的产地、采收、加工等因素，暂定每片增光片含五味子以五味子醇甲(C24H32O7)计，不得少于0.05mg。
[参考文献]
1 中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂.北京：化学工业出版社，1996，207.
2 赵陆华.高效液相色谱法分析中药成分手册.北京：中国医药科技出版社，1994，216.
3 杨云.中药化学成分提取分离手册.北京：中国中医药出版社，1998，73.
4 陈德昌.中药化学对照品工作手册.北京：中国医药科技出版社，2000，18.
5 谭生建.肝复康中五味子醇甲和五味子乙素含量测定方法的研究.解放军药学学报，2000，16(5)：270.
(编辑：江 枫)
作者单位： 415001 湖南常德，湖南德海制药有限公司, 百拇医药(刘朝晖，杨宝凡)
[关键词] 反相高效液相法；增光片；五味子醇甲；含量测定
Content determination of schizandrol A in Zengguang tablets
LIU Zhao-hui，YANG Bao-fan.
Hunan Dehai Pharmaceutical Co.Ltd.，Changde 415001，China
[Abstract] Objective To study RP-HPLC methods that determined the schizandrol A content in Zengguang tablets.Methods Schizandrol A was separated completely on an C18 column，using a mixture of methanol，acetonitrile and water(60∶5∶32)as mobile phase，with UV detection at 250nm.Results Schizandrol A has better linear correlation between 0.0672μg and 0.672μg，the results also have shown the recovery rate was 97.64%，RSD 1.21%.Conclusion The methods is very stable and accurate，and has good reappearance.It can be used for quality control of Zengguang tablets.
[Key words] RP-HPLC;Zengguang tablets;schizandrol A;content determination
增光片是由枸杞子、当归、党参、茯苓、五味子等10味中药组成的中药复方制剂。具有补益气血、滋养肝肾、明目安神、增加视力的功效，临床上用于治疗近视眼[1]。本品收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十一册，原标准中只有显微鉴别和通用的理化鉴别，无含量测定项目，为了更好地控制产品质量，本文建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定增光片中五味子醇甲的含量，抑制增光片的质量，以确保临床疗效[2～5]。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10AV紫外检测器；CT-100恒温箱。LC2002数据处理系统。上海必能信CQ-250型超声波清洗器。BP211DAG电子天平(德国Sartorius)。
1.2 试剂 甲醇为色谱醇；甲醇、天水乙醇、乙腈均为分析纯；水为重蒸水。五味子醇甲(中国药品生物制品检定所，批号：110857-200304)；增光片(湖南德海制药有限公司，批号：030426)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 (1)色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱Diamonsil(TM)C18(250×4.6mm)，5μm(迪马公司)；(2)流动相：甲醇-乙腈-水(60∶5∶32)；(3)检测波长：254nm；(4)流速：1.0ml/min；(5)柱温：40℃。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥12h的五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1ml含0.0336mg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备 取增光片20片，除去糖衣，精密称定，研细，取细粉约2g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理45min，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例称取除五味子的其他药材适量，依照增光片的制备工艺和供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2.5 线性关系的考察 分别精密吸取五味子醇甲对照品溶液(浓度0.0336mg/ml)2μl、4μl、8μl、12μl、20μl，注入液相色谱仪，测定，以五味子醇甲的进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=8E+06X+23682(r=0.9997)。结果表明五味子醇甲在0.0672～0.672μg范围内具有良好的线性关系。
2.6 精密度试验 精密吸取五味子醇甲对照品溶液(0.0336mg/ml)10μl，重复进样6次，峰面积积分值分别为2395570、2440616、2396849、2394535、2467203、2425933，RSD=1.24%。表明本方法精密度良好。
2.7 重复性试验 取同一批增光片(批号：030426)，除去糖衣，研细，取细粉5份，每份约2g，精密称定，按2.3项下的方法制备样品，进行含量测定。结果分别为0.1026mg/片、0.0999mg/片、0.0992mg/片、0.0986mg/片、0.0982mg/片，平均为0.0997mg/片，RSD为1.75%。表明本方法具有较好的重复性。
2.8 稳定性试验 取重复性试验项下试验号4的供试品溶液，每2h进样1次，每次10μl，连续进样6次，结果表明在10h内峰面积积分值基本稳定，RSD为1.58%。结果平均回收率为97.64%，RSD为1.21%。见表1。
2.9 回收率试验 贮备溶液：精密称取五味子醇甲对照品3.7mg，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1ml中含五味子醇甲0.37mg的溶液。
取已知含量(批号：030426，含量为0.0997mg/片)的增光片，除去糖衣，研细，取1.0g(6份)，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入贮备溶液0.8ml、1ml、1.2ml，置水浴上挥发至干，按供试品溶液制备方法进行制备并测定含量，计算回收率，结果平均回收率为97.64%，RSD为1.21%。见表1。
表1 回收率试验结果(略)
2.10 样品测定 按拟定的含量测定方法测定10批增光片中五味醇甲的含量，结果见表2。
表2 含量测定结果(略)
3 讨论
笔者曾对提取溶媒、提取时间进行了考察，结果以加入甲醇、超声处理45min为佳。干扰试验结果表明：五味子的阴性对照样品无干扰。方法学考察结果表明：五味子醇甲在0.0672～0.672μg范围内呈良好的线性关系；该方法精密度良好，具有较好的重复性和稳定性，平均回收率为97.64%。因此该方法可用于增光片的质量控制。根据测定的结果，并考虑到药材的产地、采收、加工等因素，暂定每片增光片含五味子以五味子醇甲(C24H32O7)计，不得少于0.05mg。
[参考文献]
1 中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂.北京：化学工业出版社，1996，207.
2 赵陆华.高效液相色谱法分析中药成分手册.北京：中国医药科技出版社，1994，216.
3 杨云.中药化学成分提取分离手册.北京：中国中医药出版社，1998，73.
4 陈德昌.中药化学对照品工作手册.北京：中国医药科技出版社，2000，18.
5 谭生建.肝复康中五味子醇甲和五味子乙素含量测定方法的研究.解放军药学学报，2000，16(5)：270.
(编辑：江 枫)
作者单位： 415001 湖南常德，湖南德海制药有限公司, 百拇医药(刘朝晖，杨宝凡)