树突细胞;_胎血;_沙培林(non_MESH)_

沙培林诱导脐血树突状细胞的成熟

http://www.100md.com 《福建医科大学学报》 2006年第4期

树突细胞;,胎血;,沙培林(non,MESH),,树突细胞;,胎血;,沙培林(non,MESH),1材料与方法,2结果,3讨论,参考文献：

     摘要:目的改进体外诱导脐血树突状细胞(DC)成熟的方案,为后期制备临床使用的抗肿瘤DC疫苗提供新的技术路线。方法分离脐血单个核细胞(CBMC)并在含10%同源脐血浆、重组人粒巨噬细胞集落刺激因子(rhGMCSF)和重组人白细胞介素4(rhIL4)的培养体系中诱导培养,部分加入肿瘤冻融抗原和/或沙培林(OK432)冲击,光镜和电镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测培养前后各组细胞表面抗原CD1a和CD83的表达情况。结果培养过程中,细胞形态发生明显变化,呈现典型的DC形态。收集第9天各组DC,细胞表面均高度表达CD1a和CD83,与贴壁分离的CBMC比较有统计学意义,肿瘤冻融抗原冲击后,DC表面CD1a和CD83的表达上调,沙培林进一步刺激后,CD1a和CD83表达率显著升高。结论诱导脐带血来源的前体细胞分化为未成熟DC的途径相对简便；沙培林能促进肿瘤冻融抗原冲击后的脐血DC进一步成熟。

    关键词:树突细胞; 胎血; 沙培林(non MESH)

    树突状细胞(DC)是目前所知体内功能最强的抗原呈递细胞,具有打破肿瘤免疫耐受并激发特异性肿瘤免疫继而抑制肿瘤发展的能力。随着DC的体外培养扩增技术的日益成熟,肿瘤DC疫苗作为肿瘤免疫治疗的新方法,显示了良好的抗肿瘤前景\[13\]。由于患者免疫功能处于抑制状态,临床应用时通常难以从患者骨髓或外周血获得相应足够数量的前体细胞用于诱导培养DC。脐血含有丰富的造血干细胞,免疫原性相对较弱且来源广泛,采集方便,可作为抗肿瘤DC疫苗前体细胞的重要来源。笔者采用链球菌制剂——沙培林诱导联合肿瘤细胞冻融抗原冲击促进DC成熟的方法,研制脐血单个核细胞来源的DC,并分别从形态学和细胞表型方面进行鉴定。

    1材料与方法

    1.1材料RPMI 1640培养基(美国GIBICO公司)。重组人白细胞介素4(rhIL4,美国R&D公司)。重组人粒巨噬细胞集落刺激因子(rhGMCSF,厦门特宝生物公司)。胎牛血清(杭州江滨生物技术公司)。淋巴细胞分离液(中科院天津灏洋生物制品公司)。单克隆抗体包括异硫氰酸荧光素(FITC)标记的鼠抗人CD1a和CD83及FITC标记的同型IgG1(美国Ancell公司)。沙培林(OK432,山东鲁抗制药公司)。

    1.2方法

    1.2.1制备人胃癌细胞冻融抗原参照文献\[3\],常规培养人胃癌细胞株SCG7901细胞,制成1×107mL-l的细胞悬液,-20~37 ℃反复冻融4次,离心收集上清液,过滤,-20 ℃保存备用 ......

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