一氧化氮合酶;_基因转移;_逆转录病毒科;_肌

iNOS转基因在血管平滑肌细胞的表达

http://www.100md.com 《福建医科大学学报》 2006年第4期

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     摘要:目的研究逆转录病毒介导诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因在体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)中的表达。方法通过脂质体介导的DNA转染法将PLXSNiNOS导入PA317细胞中;经G418筛选获得抗性克隆;用NIH3T3细胞测定病毒上清滴度;将病毒上清转染体外培养的VSMC;采用RTPCR、Western blot检测VSMC内iNOS mRNA和蛋白的表达。结果PLXSNiNOS转染体外培养的VSMC 48 h后,在VSMC内可检测到外源性iNOS mRNA和蛋白;而用PLXSN转染体外培养的VSMC 48 h后未能检测到外源性iNOS mRNA和蛋白表达。结论逆转录病毒介导iNOS基因可高效转染体外培养的VSMC,并在细胞内表达iNOS蛋白。

    关键词:一氧化氮合酶; 基因转移; 逆转录病毒科; 肌,平滑,血管; 细胞,培养的

    基因治疗是利用分子生物学和细胞生物学技术,将外源基因转移到体内,以期通过导入基因的表达,补充缺失或失去正常功能的蛋白质,或调节体内某些基因的表达而达到治疗目的的一种方法。目前基因治疗主要集中在肿瘤和某些单基因缺陷所引起的遗传病上,关于心血管疾病的基因治疗正处于起步阶段。笔者采用逆转录病毒载体介导的DNA转染法,将诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因导入体外培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)中,观察其在VSMC中的表达,报道如下。

     1材料与方法

    1.1质粒和细胞株含大鼠iNOS全长cDNA的逆转录病毒载体质粒PLXSNiNOS(美国Intermune Inc JIN HONG博士惠赠); PA317细胞、NIH3T3细胞(中国科学院上海生命科学研究院)。

    1.2重组逆转录病毒质粒的包装与病毒上清制备逆转录病毒载体质粒PLXSNiNOS通过LipofectamineTM2000 Reagent(美国Invitrogen公司)转染PA317细胞;经G418(Geneticin,美国Gibco公司)筛选抗性细胞克隆;NIH3T3细胞测定病毒上清滴度 ......

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