褪黑素对冈田酸致NG10815细胞tau蛋白过度磷酸化的影响
褪黑激素;,冈田酸;,tau蛋白质类;,磷酰化;,阿尔茨海默病,,褪黑激素;,冈田酸;,tau蛋白质类;,磷酰化;,阿尔茨海默病
摘要:目的观察褪黑素(MLT)对冈田酸(OA)致大鼠神经母细胞和小鼠胶质细胞瘤细胞的杂交细胞系NG10815细胞tau蛋白过度磷酸化的影响。方法10 nmol/L OA作用于NG10815细胞0,3,6,12及24 h，免疫细胞化学法和免疫印迹法(Western blot法)观察Ser396位点磷酸化tau蛋白,观察MLT对细胞内Ser396位点磷酸化tau蛋白的影响。结果在OA作用后3 h增高,6 h达到峰值,之后逐渐降低。选取OA作用6 h,低、高剂量MLT较模型组Ser396位点磷酸化tau蛋白水平明显降低。结论MLT可对抗tau蛋白过度磷酸化,可能是其发挥抗阿尔茨海默病作用的机制之一。关键词:褪黑激素; 冈田酸; tau蛋白质类; 磷酰化; 阿尔茨海默病
阿尔茨海默病(AD)是一种常见的神经退行性疾病,临床尚无有效的防治药物。褪黑素(MLT)是由松果体分泌的一种神经内分泌激素,具有抗衰老、脑细胞损伤保护等作用,为体内抗自由基、抗氧化作用很强的活性物质。临床研究显示,AD病人脑脊液中MLT水平低下\[1\]。过度磷酸化的微管相关蛋白tau形成的神经原纤维缠结(NFT)是AD脑中主要病理特征,有报道MLT可预防大鼠脑组织中由异丙肾上腺素引起的AD样tau蛋白的过度磷酸化\[2\]。笔者观察MLT对冈田酸(OA)致NG10815细胞tau蛋白过度磷酸化的影响,为MLT及其同系物可能应用于防治AD提供细胞学实验依据。
1材料和方法
1.1材料
1.1.1药品和试剂MLT(美国Sigma公司),临用前用无水乙醇溶解,再加生理盐水配制,乙醇终浓度不超过0.5%。OA(美国Sigma公司),用DMSO配成20 μmol/L的母液,分装备用。抗tau蛋白多克隆抗体(美国Santa Cruz公司)。胎牛血清(杭州四季青生物工程公司)。1640培养液(美国Gibco公司)。其他试剂均为国产分析纯。
1.1.2细胞大鼠神经母细胞和小鼠胶质细胞瘤细胞的杂交细胞系NG10815细胞,由福建医科大学附属协和医院老年研究所提供。
1.1.3仪器CO2培养箱(美国SHEL LAB公司);倒置相差显微镜(日本Olympus公司);蛋白电泳槽、转膜装置(日本EC公司) ......
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