冻存骨髓基质细胞体外成骨潜能的实验研究
骨生成；,细胞增殖；,骨髓细胞,细胞分化；,间质细胞,,骨生成；,细胞增殖；,骨髓细胞，细胞分化；,间质细胞,1材料与方法,2结果,3讨论,参考文献：
摘要:目的观察冻存骨髓基质细胞(BMSC)的体外生长特点及诱导与非诱导条件下的成骨能力。方法取冻存11个月犬BMSC复苏后进行体外扩增培养，传代培养中加入108 mol/L地塞米松、50 mg/L Vit C和10 mmol/L β甘油磷酸钠进行诱导分化，观察细胞形态、细胞诱导前后增殖情况、细胞碱性磷酸酶(ALP)含量以及形成矿化结节能力的改变。结果冻存BMSC复苏后呈成纤维样表现，增殖力强。在诱导液的作用下冻存BMSC增殖性能降低，ALP活性增加，诱导5 d后可见矿化结节。结论冻存BMSC增殖能力强，经诱导后表现出明显的成骨活性，可作为骨组织工程的种子细胞。关键词:骨生成； 细胞增殖； 骨髓细胞，细胞分化； 间质细胞
骨髓基质细胞(BMSC)作为间充质细胞，具有多向分化潜能，是理想的骨组织工程的种子细胞，有着广泛的应用前景\[13\]。随着细胞生物学及组织工程学研究的深入和发展，对BMSC的需求量越来越大，对其进行长期、大量的保存十分必要。笔者通过对冻存BMSC复苏后的培养扩增与诱导分化，了解其在体外的成骨能力，为进一步研究和应用打下基础。
1材料与方法
1.1动物与材料健康成年Beagle雌性犬1只(中科院上海实验动物中心提供，体质量11 kg)。CO2培养箱(德国Heraeus公司)；液氮罐(美国CBS公司)；离心机(德国Heraeus公司)；倒置相差显微镜(日本Olympus公司)；酶联免疫检测仪(德国Human公司)；噻唑蓝(MTT，美国Biomo公司)；碱性磷酸酶(ALP)活性底物(长春汇力生物技术有限公司)；新生牛血清(杭州江滨生物技术有限公司)；DMEM(美国Gibco公司)；二甲基亚砜(DMSO，中国医药集团上海化学试剂公司)；地塞米松、Vit C和β甘油磷酸钠均为美国Sigma公司产品。
1.2方法
1.2.1BMSC的获得氯胺酮麻醉下用16号上颌窦穿刺针取Beagle犬后腿股骨骨髓5 mL，采用实验室所用的“改良全骨髓培养法”获取细胞\[4\]，培养传至第2代冻存。
1.2.2BMSC的冻存与复苏以浓度为10%DMSO、10%新生牛血清、80%DMEM配制冻存保护剂，预冷。取第二代生长状况良好的BMSC，在细胞长满瓶底约80%时用0.25%胰蛋白酶+0.1%EDTA消化，离心收集细胞，以终浓度为2.5×106 mL1的细胞浓度加入冻存保护剂中，按4 ℃ 0.5 h、-20 ℃ 0.5 h和-80℃冰箱过夜后放入液氮中。11个月后取出，在37 ℃恒温水浴中迅速翻转解冻 ......
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