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编号:11176670
生物芯片表面氨基密度检测及稳定性研究
http://www.100md.com 《分析化学》 2006年第9期
氨基化,微流体,单层膜,稳定性,多层膜,,氨基化,微流体,单层膜,稳定性,多层膜,摘要,关键词,1引言,2实验部分,3结果与讨论,References
     摘要 用不同氨基硅氧烷试剂在石英或玻璃片基表面上进行氨基化反应,将氨基化片基与芳香醛反应生成亚胺,再将亚胺水解在已知体积的乙酸水溶液中,得到相应的芳香醛溶液,利用UVvis光谱检测其吸光度。这样,在水解液中检测到的醛的数量等于片基表面生成的亚胺的数量。由已知的水解液体积和片基表面积可以计算出片基表面氨基的相对密度。因9蒽醛具有较大的摩尔消光系数(262 nm,6.36 × 107 cm2/mol,0.8% CH3COOH aq.),所以,可以明显提高生物芯片表面氨基密度检测的灵敏度。实验还研究了各种氨基化试剂组装成膜的最佳反应条件及其在去离子水、酸性及碱性水溶液中的稳定性,结果表明:氨基化片基在去离子水中有很好的稳定性。

    关键词 氨基化,微流体,单层膜,稳定性,多层膜

     1 引言

    在羟基化片基表面进行氨基硅烷化被广泛用于表面修饰反应[1,2]。表面组装的氨基可以和许多活性基团反应,使其表面生成羟基、氨基或醛基等带有生化活性的官能团,利用这些官能团可以键合酶、蛋白质、抗原抗体、生物素等生化大分子或其它生化试剂,能使成千上万个与生命相关的信息集成在一块厘米见方的芯片上,便于进行分离和检测。在氨基化片基表面组装的氨基是进一步组装其它功能基团的基础[3~5],还可以固定无机催化剂、修饰电极、聚合物离子[6]、非线性载色体[7]、富勒烯[8]、卟啉[9]以及过渡金属复合物[10]等,片基表面的氨基密度及稳定性直接影响下一步组装的生化分子的数量和稳定性,Park等[11]采用对硝基苯甲醛与片基表面氨基反应生成西佛碱的方法来测定表面氨基密度,但大多数的微流体器件的尺寸约数cm2,用对硝基苯甲醛检测氨基密度的灵敏度较低,实验采用具有较大的摩尔消光系数9蒽醛作为检测试剂,与片基表面氨基反应生成西佛碱,结合使用较小体积的水解液,可以明显提高氨基的检测灵敏度。实验还考察了各种氨基化试剂组装膜在去离子水、酸性及碱性水溶液中的稳定性,结果表明氨基化片基在去离子水中比较稳定。

     2 实验部分

    2.1 仪器和试剂

    2550紫外可见分光光度计(日本岛津公司);波长范围:200~800 nm。

    氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)、氨丙基二乙氧基甲基硅烷(APDEMS)、氨丙基二甲基乙氧基硅烷(APEDMS)、氨丙基二甲基甲氧基硅烷(APDMMS)、对硝基苯甲醛、9蒽醛、2萘醛、1芘醛(Acros) ......

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