超支化聚酯化学键合涂层毛细管电泳柱的制备及碱性蛋白质的分离
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摘要 用一步法和准一步法合成了以三羟甲基丙烷为核的两个系列的超支化聚酯，利用红外光谱、羟值测定等手段对其分子结构进行了表征。利用超支化聚合物低粘度的特点，采用化学键合的方法将其涂于石英毛细管电泳柱内壁，使其在毛细管内壁上形成稳定的超支化聚酯涂层。该涂层在pH 3.0～7.0范围内能够有效地抑制电渗流和碱性蛋白质在毛细管壁上的吸附。实验结果表明:该涂层柱在pH 5.0的磷酸缓冲溶液中，对碱性蛋白质的分离柱效可高达塔板数106/m。每次运行之间(n=6)，天与天之间(n=3)，以及柱与柱之间(N=3)的迁移时间的标准偏差(RSD%)在0.5%~1.5%之间，表明本方法制得的涂层柱具有良好的稳定性。关键词 毛细管电泳，蛋白质，涂层柱，超支化聚酯
1 引言
生命科学的快速发展对生物样品的分析分离提出越来越高的要求。由于生物样品种类繁多，结构复杂，样品量少，分离比较困难，所以人们迫切希望找到一种高通量、高灵敏度、高效率的分析分离方法。高效毛细管电泳以其分离效率高，分析速度快，样品用量少，容易实现自动化等优点,在生物样品的分析方面发挥着重要作用，自从20世纪80年代初创立起，毛细管电泳就很快成为分析化学领域的前沿课题之一[1]。由于毛细管内壁表面的硅羟基负电点，使管内壁对生物大分子，特别是碱性蛋白质产生强烈的吸附作用，会导致分离峰拖尾、峰形展宽、分离效率与迁移时间重复性下降，吸附严重时会导致分离的失败[2~5] 。本实验利用一步法和准一步法合成了超支化聚酯[6~8]，将其用作毛细管电泳柱的涂层材料，克服了传统聚合物高浓度必然伴随高粘度的缺点，因而很容易涂敷于毛细管柱内壁形成稳定的涂层，所制备的涂层柱能有效地抑制碱性蛋白质在毛细管壁的吸附作用，达到良好的分离效果。
2 实验部分
2.1 试剂与仪器
2,2二羟甲基丙酸：化学纯(山东赛美克化工有限公司)；三羟甲基丙烷、对甲苯磺酸：分析纯(中国医药集团上海化学试剂公司)；二甲亚砜：分析纯(天津市大茂化学仪器供应站)；细胞色素C 、溶菌酶和核糖核酸酶A(美国Sigma公司)；其它试剂均为分析纯。宾达1229型毛细管电泳仪(北京新技术应用研究所)；UV214nm检测器 ......
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