肽类药物_反相高效液相色谱_液相色谱电喷雾质谱

多种酶体系用于肽类药物体外代谢性质的研究

http://www.100md.com 《分析化学》 2006年第9期

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     摘要应用反相高效液相色谱法(RPHPLC)对肽类药物促黄体激素释放激素(LHRH)、醋酸亮丙瑞林(Leuprorelin Acetate,TAP144SR)和新药LXT101在6种酶体系中的体外代谢性质进行了研究。流动相采用梯度或等度洗脱；LHRH、TAP144SR的检测波长为216 nm，LXT101的检测波长为225 nm。采用液相色谱电喷雾质谱(LCESIMS)联用技术对其酶解片段进行了鉴定。LHRH、TAP144SR和LXT101的浓度在40~400 mg/L范围内与其峰面积呈良好线性关系(r>09990);在糜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶和胰混合酶中的绝对回收率为950%~987%;在血浆和肝匀浆中的绝对回收率为600%~710%;日内相对标准偏差(RSD)<15%，日间RSD<25%;半衰期(t1/2)为LXT101>TAP144SR>LHRH；质谱鉴定表明：LHRH容易在34、56位发生断裂，TAP144SR容易在34位发生断裂；选择的酶体系可用于评价多肽药物的体外代谢性质。

    关键词肽类药物，反相高效液相色谱，液相色谱电喷雾质谱，体外酶体系，半衰期

     1 引言

    肽类药物具有剂量低、毒副作用小等特点，近年来已被越来越多地应用于临床治疗各种疾病。但由于其在体内各种酶的作用下可快速降解[1]，导致生物利用度低，半衰期短，从而不利于临床用药治疗。因此寻找体内半衰期长、生物利用度高的生物活性长效肽成为多肽药物研究的重点。文献曾报道采用与酶抑制剂联合用药[2,3]、非天然氨基酸置换天然氨基酸[4,5] 以及N、C端的修饰[2]等方式，可以延长肽类药物在体内的生物活性。

    促黄体激素释放激素(LHRH)是一种含有10个氨基酸的小分子肽，可以促使卵泡刺激素(FSH)和促黄体生成素(LH)的释放[6]，从而用于治疗与此类激素相关的一些疾病，如子宫内膜异位症，前列腺癌等[7,8]。但由于其在体内各种酶的作用下可快速降解，从而不利于临床用药治疗。为了延长其在体内的半衰期，国外在LHRH的结构基础上经过改造修饰得到醋酸亮丙瑞林(leuprorelin acetate,TAP144SR)，已成功应用于临床治疗与性激素相关的一些疾病。LHRH、TAP144SR及LXT101的氨基酸序列如下。

    LHRH pGluHisTrpSerTyrGlyLeuArgProGlyNH2

    TAP144SR pGluHisTrpSerTyrDLeuLeuArgProNHCH2CH3 ·xHAc ......

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