琥珀酰亚胺_琥珀酰胺酸_环二酰胺酶

高效液相色谱法测定琥珀酰亚胺及其酶解产物

http://www.100md.com 《分析化学》 2006年第9期

琥珀酰亚胺,琥珀酰胺酸,环二酰胺酶,高效液相色谱,核磁共振谱,,琥珀酰亚胺，,琥珀酰胺酸，,环二酰胺酶，,高效液相色谱，,核磁共振谱,1引言,2实验部分

     摘要采用HPLC法，以Symmetry C18 柱(46 mm×150 mm，5 μm)，甲醇∶10 mmol/L磷酸缓冲液(pH 65)＝5∶95(V/V)为流动相，在波长210 nm检测条件下，使琥珀酰亚胺及其酶解产物琥珀酰胺酸得到了较好的分离。琥珀酰亚胺与琥珀酰胺酸的质量浓度与峰面积呈良好的线性关系，相关系数均在0999以上。该方法既可用于定量分析琥珀酰亚胺和琥珀酰胺酸，又能用于测定环二酰胺酶的活性及产物转化率。检测精度可达μg水平;用NMR确认了酶分解物质的分子结构。

    关键词琥珀酰亚胺，琥珀酰胺酸，环二酰胺酶，高效液相色谱，核磁共振谱

     1 引言

    环二酰胺酶(cyclic imidase, E.C. 3.5.2.16)是环酰胺酶类如海因酶、二氢嘧啶酶等中的一个亚类，可水解相应的环酰胺类底物[1]。Ogawa等研究芽生杆菌(Blastabater Sp.)A17p4中的环二酰胺酶时发现，其底物专一性更倾向于简单有机环酰胺，如琥珀酰亚胺或是马来酰亚胺，且酶的亚基分子量为35 kDa，而一般环酰胺酶为50～60 kDa[2,3]。该酶在体内主要参与二元酸的代谢，特别是TCA循环(图1)[4]，因此该酶在手性有机酸的合成中有着潜在的应用价值。

    图1 琥珀酰亚胺的代谢转化途径(略)

    Fig.1 Pathway for succinimide metabolic transformation

    实验构建了一株产环二酰胺酶的重组菌株 ......

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