柱前衍生化_高效液相色谱法_血清_2

柱前衍生高效液相色谱法测定血清中克拉霉素的含量

http://www.100md.com 《分析化学》 2006年第9期

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     摘要建立了2,4二硝基苯肼柱前衍生反相高效液相色谱紫外检测法测定血清中克拉霉素的含量，将在碱性条件下甲基叔丁基醚的血清萃取物，与2,4二硝基苯肼在55℃酸性条件下反应30 min，然后用乙腈0.05 mol/L pH 7.2磷酸盐缓冲液(48∶52)在Alltima C18色谱柱上进行分离，在340 nm检测衍生物。方法的线性范围为0.05～3.2 mg/L(r=0.9993)；检出限为30 μg/L，绝对回收率大于89%,相对标准差小于10%。本方法已用于克拉霉素在健康受试者中的药代动力学研究。

    关键词柱前衍生化，高效液相色谱法，血清， 2,4二硝基苯肼，克拉霉素

     1 引言

    克拉霉素(clarithromycin)是新型大环内酯类抗生素，临床上主要用于治疗扁桃体炎、脓疱病、丹毒、毛囊炎及伤口感染等[1]。在进行克拉霉素的药代动力学或治疗药物浓度检测研究中，需要建立高灵敏度的测定方法。目前测定血样中克拉霉素的浓度方法有高效液相紫外检测方法[2]、微生物方法[3]、液相质谱方法[4]和高效液相电化学检测方法[5]。紫外检测方法因克拉霉素本身吸收不强且血样干扰成分多，最低定量浓度仅达到0.1 mg/L；因样品中存在活性代谢物，微生物法测定的是总的抗菌活性，没有专属性； HPLC电化学检测和LCMS灵敏度高，但需要特殊仪器且测试成本较高；文献[6]报道用9fluorenylmethyloxycarbonylchloride(FMOCCl)对克拉霉素进行衍生化，衍生化试剂与克拉霉素的羟基反应，采用荧光检测，但该方法最低定量浓度仅为0.2 mg/L，灵敏度并没有实质性提高。本实验采用2，4二硝基苯肼(DNPH)与克拉霉素中的羰基生成具有紫外吸收衍生物的原理 ......

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