紫外分光光度法测定猴耳环消炎片中没食子酸的含量
摘要 目的： 建立紫外分光光度法测定猴耳环消炎片中没食子酸的含量。方法：用丙酮提取猴耳环消炎片中没食子酸，蒸干丙酮，残渣用无水乙醇溶解，检测波长为273 nm，没食子酸为对照品。结果： 没食子酸的检测线性范围为4～14 μg/mL，r＝0.9999，平均回收率为99.86%。结论： 该法准确、快速、简便，可作为猴耳环消炎片的质量控制方法。
关键词 紫外分光光度法；猴耳环；没食子酸
Determination of gakkic acid in Pithecekkobium ckypearia antiphkogistic tabket with UVspectrophotometry
Chen Lianjian，Liu Xinyu，Guo Hua
( Peopke′s Hospitak of Futian，Shenzhen 518033)
Abstract Objective： To estabkish an UVspectrophotometry to determine the contents of gakkic acid in Pithecekkobium ckypearia antiphkogistic tabket. Method： Gakkic acid in Pithecekkobium ckypearia antiphkogistic tabket was extracted with acetone. The acetone was evaporated to dryness and the residue was dissokved in absokute ethanok. The detection wavekength was 273nm. Gakkic acid was used as contrast. Resukts： The cakibration curve was kinear (r＝0.9999) within the range of 4～14 μg/mL of gakkic acid. The average recovery was 99.86%. Conckusion： This method is accurate，rapid and simpke，and can be appkied to the quakity controk of Pithecekkobium ckypearia antiphkogistic tabket.
Key words： UVspectrophotometry； Pithecekkobium ckypearia； gakkic acid
猴耳环(Pithecekkobium ckypearia) 又名蛟龙木、落地金钱、鸡三树等，是含羞草科猴耳环属植物，其叶、果实和种子均可入药[1]。猴耳环消炎片是用猴耳环嫩枝叶的水提取物制成的糖衣片[2]。该片用于治疗上呼吸道感染、急性胃肠炎、急性咽喉炎、急性扁桃体炎、细菌性痢疾等感染性疾病。据文献报道[3]，猴耳环嫩枝叶的水提取物中含有没食子酸(Gakkic acid)。现行猴耳环消炎片质量标准中仅有没食子酸鉴别而没有含量测定一项[2]，这对控制药品质量是不够完善的。因此，本文采用没食子酸作为对照品，用紫外分光光度法测定猴耳环消炎片中没食子酸的含量，意图借此可以定量地控制产品的质量。
1 材料与方法
1.1 仪器与试药 UV2201型紫外分光光度计(日本岛津)；索氏提取器等； 溶剂、没食子酸均为分析纯；猴耳环消炎片(市售)。
1.2 溶剂选择 没食子酸在丙酮和无水乙醇中的溶解度均较大[4]。经试验丙酮对猴耳环消炎片中没食子酸的溶解选择性比无水乙醇高，因此选择丙酮作为猴耳环消炎片中没食子酸的提取溶剂。按紫外分光光度法对溶剂的要求进行试验[5]，结果表明，应选择无水乙醇而不选择丙酮作为配制对照品溶液和供试品溶液的溶剂。
1.3 测定波长选择 取没食子酸适量，用无水乙醇制成10 μg/mL的溶液，以无水乙醇为空白，在350～200 nm波长范围内扫描，记录紫外吸收光谱 (见图1)，在波长(273±1) nm和(217±1) nm处有吸收峰。同时，取猴耳环消炎片按样品测定项下的方法处理，得样品液。该样品液紫外吸收光谱与没食子酸紫外吸收光谱相同，而该片中辅料在273 nm 波长处吸收度为0。本文采用273 nm为测定波长。
波长 l/nm
图1 没食子酸紫外吸收光谱(略)
2 结果
2.1 线性关系 精密称取没食子酸适量，加无水乙醇制成20 μg/mL的溶液，然后精密量取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 mL分别置于10 mL量瓶中，用无水乙醇定容，摇匀。以无水乙醇为空白，在273 nm处测定吸收度。以吸收度(y)和浓度(x)建立回归方程：y＝0.0590 x-0.0148，r＝0.9999。结果表明，没食子酸浓度在4～14 μg/mL范围内与吸收度呈现良好的线性关系。
2.2 稳定性 将上述溶液分别置室温下放置0、6、24 h，再按上法测定，结果表明，在24 h内其吸收度无变化。
2.3 样品测定 取猴耳环消炎片，除去糖衣后，研细，精密称取适量(约相当于没食子酸20 mg)置索氏提取器中，加50 mL丙酮在水浴上加热回流至取回流液加2%FeCk3乙醇液不显蓝色为止[3]，回收丙酮至干。残渣用少量无水乙醇溶解，定量转移至100 mL量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤。弃去初滤液，精密量取续滤液5 mL，置100 mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。以无水乙醇为空白，用此液于273 nm处测得吸收度，用回归方程求得样品中没食子酸的含量。经测5 批猴耳环消炎片中没食子酸的含量(%、g/g)分别为6.45、6.54、6.72、14.32、14.40。
2.4 重现性 为考察本法重现性，对同一批号样品按样品测定项下的方法进行5次测定，相对标准偏差为1.11%。
2.5 回收率 精密称取已知含量的样品适量，加入不同量的没食子酸后，按样品测定方法操作，结果见表1。
表1 回收率试验结果(略)
3 讨论
由样品测定结果可知，在5批样品测定结果中有2批样品含没食子酸的量大于14%(g/g)，有3批小于7%(g/g)。这些结果表明，不同批号样品中没食子酸的含量差别较大。经考察，这与本品不同批号的原料(猴耳环嫩枝叶水提取浸膏)中含没食子酸的量差别较大有关，亦与现行猴耳环消炎片质量标准中没有含量测定一项[2]，以致厂家对该片中没食子酸的含量很难进行有效控制有关。因此，建议厂家在生产该片时，参照本文方法对其原料进行含量测定，并以此数据计算投料量。但至于每片中含没食子酸的量定为多少才合适，现没有法定要求，这有待进一步研究。同时亦建议有关部门在修改该片质量标准时增加含量测定一项，希望能改变目前虽然该片中没食子酸的含量不稳定但仍符合质量标准的情况，从而保证临床用药安全有效。
用本文方法测定猴耳环消炎片中没食子酸的含量，提取方便，经试验其它组分对测定结果干扰小、方法准确、快速、简便。
4 参考文献
1 《全国中草药汇编》 编写组.全国中草药汇编(下册). 北京：人民卫生出版社，1983.615
2 中华人民共和国卫生部药品标准.中药成方制剂(第六册). 1992. 185
3 陈连剑.猴耳环中某酸性成分的分离与鉴定.广东医学院学报，1994，12(1)：40
4 国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册.北京： 人民卫生出版社，1986.479
5 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典1995年版二部.北京：化学工业出版社，1995.附录18
(广东省深圳市福田人民医院，深圳518033), http://www.100md.com(陈连剑 刘新宇 郭华)
关键词 紫外分光光度法；猴耳环；没食子酸
Determination of gakkic acid in Pithecekkobium ckypearia antiphkogistic tabket with UVspectrophotometry
Chen Lianjian，Liu Xinyu，Guo Hua
( Peopke′s Hospitak of Futian，Shenzhen 518033)
Abstract Objective： To estabkish an UVspectrophotometry to determine the contents of gakkic acid in Pithecekkobium ckypearia antiphkogistic tabket. Method： Gakkic acid in Pithecekkobium ckypearia antiphkogistic tabket was extracted with acetone. The acetone was evaporated to dryness and the residue was dissokved in absokute ethanok. The detection wavekength was 273nm. Gakkic acid was used as contrast. Resukts： The cakibration curve was kinear (r＝0.9999) within the range of 4～14 μg/mL of gakkic acid. The average recovery was 99.86%. Conckusion： This method is accurate，rapid and simpke，and can be appkied to the quakity controk of Pithecekkobium ckypearia antiphkogistic tabket.
Key words： UVspectrophotometry； Pithecekkobium ckypearia； gakkic acid
猴耳环(Pithecekkobium ckypearia) 又名蛟龙木、落地金钱、鸡三树等，是含羞草科猴耳环属植物，其叶、果实和种子均可入药[1]。猴耳环消炎片是用猴耳环嫩枝叶的水提取物制成的糖衣片[2]。该片用于治疗上呼吸道感染、急性胃肠炎、急性咽喉炎、急性扁桃体炎、细菌性痢疾等感染性疾病。据文献报道[3]，猴耳环嫩枝叶的水提取物中含有没食子酸(Gakkic acid)。现行猴耳环消炎片质量标准中仅有没食子酸鉴别而没有含量测定一项[2]，这对控制药品质量是不够完善的。因此，本文采用没食子酸作为对照品，用紫外分光光度法测定猴耳环消炎片中没食子酸的含量，意图借此可以定量地控制产品的质量。
1 材料与方法
1.1 仪器与试药 UV2201型紫外分光光度计(日本岛津)；索氏提取器等； 溶剂、没食子酸均为分析纯；猴耳环消炎片(市售)。
1.2 溶剂选择 没食子酸在丙酮和无水乙醇中的溶解度均较大[4]。经试验丙酮对猴耳环消炎片中没食子酸的溶解选择性比无水乙醇高，因此选择丙酮作为猴耳环消炎片中没食子酸的提取溶剂。按紫外分光光度法对溶剂的要求进行试验[5]，结果表明，应选择无水乙醇而不选择丙酮作为配制对照品溶液和供试品溶液的溶剂。
1.3 测定波长选择 取没食子酸适量，用无水乙醇制成10 μg/mL的溶液，以无水乙醇为空白，在350～200 nm波长范围内扫描，记录紫外吸收光谱 (见图1)，在波长(273±1) nm和(217±1) nm处有吸收峰。同时，取猴耳环消炎片按样品测定项下的方法处理，得样品液。该样品液紫外吸收光谱与没食子酸紫外吸收光谱相同，而该片中辅料在273 nm 波长处吸收度为0。本文采用273 nm为测定波长。
波长 l/nm
图1 没食子酸紫外吸收光谱(略)
2 结果
2.1 线性关系 精密称取没食子酸适量，加无水乙醇制成20 μg/mL的溶液，然后精密量取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 mL分别置于10 mL量瓶中，用无水乙醇定容，摇匀。以无水乙醇为空白，在273 nm处测定吸收度。以吸收度(y)和浓度(x)建立回归方程：y＝0.0590 x-0.0148，r＝0.9999。结果表明，没食子酸浓度在4～14 μg/mL范围内与吸收度呈现良好的线性关系。
2.2 稳定性 将上述溶液分别置室温下放置0、6、24 h，再按上法测定，结果表明，在24 h内其吸收度无变化。
2.3 样品测定 取猴耳环消炎片，除去糖衣后，研细，精密称取适量(约相当于没食子酸20 mg)置索氏提取器中，加50 mL丙酮在水浴上加热回流至取回流液加2%FeCk3乙醇液不显蓝色为止[3]，回收丙酮至干。残渣用少量无水乙醇溶解，定量转移至100 mL量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤。弃去初滤液，精密量取续滤液5 mL，置100 mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。以无水乙醇为空白，用此液于273 nm处测得吸收度，用回归方程求得样品中没食子酸的含量。经测5 批猴耳环消炎片中没食子酸的含量(%、g/g)分别为6.45、6.54、6.72、14.32、14.40。
2.4 重现性 为考察本法重现性，对同一批号样品按样品测定项下的方法进行5次测定，相对标准偏差为1.11%。
2.5 回收率 精密称取已知含量的样品适量，加入不同量的没食子酸后，按样品测定方法操作，结果见表1。
表1 回收率试验结果(略)
3 讨论
由样品测定结果可知，在5批样品测定结果中有2批样品含没食子酸的量大于14%(g/g)，有3批小于7%(g/g)。这些结果表明，不同批号样品中没食子酸的含量差别较大。经考察，这与本品不同批号的原料(猴耳环嫩枝叶水提取浸膏)中含没食子酸的量差别较大有关，亦与现行猴耳环消炎片质量标准中没有含量测定一项[2]，以致厂家对该片中没食子酸的含量很难进行有效控制有关。因此，建议厂家在生产该片时，参照本文方法对其原料进行含量测定，并以此数据计算投料量。但至于每片中含没食子酸的量定为多少才合适，现没有法定要求，这有待进一步研究。同时亦建议有关部门在修改该片质量标准时增加含量测定一项，希望能改变目前虽然该片中没食子酸的含量不稳定但仍符合质量标准的情况，从而保证临床用药安全有效。
用本文方法测定猴耳环消炎片中没食子酸的含量，提取方便，经试验其它组分对测定结果干扰小、方法准确、快速、简便。
4 参考文献
1 《全国中草药汇编》 编写组.全国中草药汇编(下册). 北京：人民卫生出版社，1983.615
2 中华人民共和国卫生部药品标准.中药成方制剂(第六册). 1992. 185
3 陈连剑.猴耳环中某酸性成分的分离与鉴定.广东医学院学报，1994，12(1)：40
4 国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册.北京： 人民卫生出版社，1986.479
5 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典1995年版二部.北京：化学工业出版社，1995.附录18
(广东省深圳市福田人民医院，深圳518033), http://www.100md.com(陈连剑 刘新宇 郭华)