高效液相色谱电喷雾离子阱质谱法测定红葡萄酒中酚类物质
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摘要 建立了高效液相色谱质谱联用(HPLCMS)技术检测葡萄酒中酚类物质的方法，并评价其定量分析的准确性、线性、重复性和检出限，结果显示：16种酚类物质除芦丁和白藜芦醇糖苷外，平均加标回收率大于78%；相关系数R2>0.999，线性关系良好；保留时间和峰面积在日内(n=10)与日间(n=6)重复性的相对标准偏差(RSD)均分别低于2.0%和5.0%；检出限为0.05~1.0 mg/L。利用该方法对6个红葡萄酒中16种酚类物质进行了定性定量分析，其相对标准偏差(CV%)均小于5.0%，说明本方法简便、准确、灵敏、重现性好，可用于葡萄酒产品质量监控。关键词 高效液相色谱，离子阱质谱，酚类物质，红葡萄酒
1 引言
酚类物质是植物体中重要的次生代谢产物(secondary metabolite)，对植物生长发育有着重要作用。葡萄果实中含有大量的酚类物质，主要分布于果皮、种子和果梗中。在葡萄酒酿造过程中，这些物质被浸渍到葡萄酒中。葡萄酒中酚类物质不仅决定着葡萄酒的涩味和苦味的优劣与强弱、影响着葡萄酒的色泽、贮藏寿命及生物化学稳定性，是葡萄酒的“骨架成分”；而且，还对人体具有重要的生理功效。“法国悖论”(French paradox)[1,2]提出后，众多研究结果证明，酚类物质可以抑制低密度脂蛋白(LDL)氧化变性，防止各种心血管疾病，抗肿瘤，抗癌变，解毒护肝益肾等功能[3，4]。
反相高效液相色谱(RPHPLC)配备二极管阵列检测器(DAD)，具有易操作、灵敏度高和稳定性好等特点，已在葡萄酒酚类物质研究中广泛应用[6～8]。由于结构相近的酚类物质具有相似的紫外吸收，导致了HPLC/DAD在定性分析上的局限性。因此，必须借助质谱(MS)技术。质谱可提供未知酚类化合物的分子量、芳香环上取代基分布及种类等更多的分子结构信息，能够更加快速准确地完成定性分析。本实验通过优化反相高效液相色谱和电喷雾离子阱质谱联用技术的分析条件，建立了葡萄酒中酚类物质定性定量分析的准确方法，为葡萄酒产品质量监控提供技术支持。
2 实验部分
2.1 仪器及试剂
1100系列LC/MSD TrapVL液相色谱离子阱质谱联用仪(美国安捷伦公司)；LC包括G1379A在线真空溶剂脱气机、G1311A四元高压梯度泵、G1313A自动进样器、G1316A柱温箱、G1315A二极管阵列检测器；MSD包括电喷雾离子源和离子阱质谱检测器 ......
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