【摘要】 荧光定量PCR技术是近年来发展起来的一种核酸定量技术。该技术在PCR反应体系中引入了荧光标记的探针，具有高度的灵敏性、特异性和精确性等特点。荧光定量 PCR技术根据其探针的作用方式分为：Taqman技术、Amplisensor技术、Molecular beacon技术、复合探针法、ScorpionsTM 探针技术、AmplifluorTM 通用检测系统、SYBR荧光染料等类型。目前该技术已广泛应用于HBV病毒、HCV病毒、SARS病毒、禽流感病毒、炭疽芽孢杆菌、霍乱弧菌、寄生虫、病毒感染的定量监测、食品卫生检疫等生物检测领域。

    【关键词】 荧光定量PCR 荧光探针 生物检测

     1 前言

    多聚酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)是本世纪核酸分子生物学研究领域最重大的发明之一，该技术曾获1993年诺贝尔奖，已广泛用于基因克隆、临床基因诊断、环境卫生检测等领域，但常规PCR技术具有许多局限性，主要表现在：1) PCR完毕后，需要对PCR产物进行凝胶电泳分析，不能对PCR的过程进行实时监测；2)不能进行定量监测；3)容易交叉污染，产生假阳性。荧光定量 PCR技术(简称FQ-PCR)是1996年由美国Applied Biosystems公司推出的一种新的PCR技术，它通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法[1]。它的出现不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已广泛应用于基因表达研究、转基因研究、病原体定量检测、药物疗效考核、疾病分类及其发病机理的研究、新药验证等领域。本文综述国内外荧光定量 PCR技术的研究进展，为能在军民两用上广泛开发应用此技术打下基础。

     2 荧光定量 PCR技术的基本原理

    荧光PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光PCR技术的发展过程中，两个重要的发现起着关键的作用：1)在90年代早期，TaqDNA多聚酶的5’核酸外切酶活性的发现，它能降解特异性荧光标记探针，因此使得间接的检测PCR产物成为可能。2)此后荧光双标记探针的运用使在一密闭的反应管中能实时地监测反应全过程。这两个发现的结合以及相应的仪器和试剂的商品化发展导致实时荧光PCR方法在研究工作中的运用 ......