双歧杆菌种类鉴定的基因学方法
双歧杆菌,参考文献
双歧杆菌是人和动物肠道内最主要的生理性细菌,在提高宿主健康方面是关键的共生体。目前已发现,双歧杆菌属包括32个种,每个种还包括若干亚种,双歧杆菌种类如此繁多,因此对它们进行鉴定和分类就是至关重要的,现对双歧杆菌种类鉴定的基因学方法综述如下。随着分子生物学的发展,细菌分类学发生了显著的改变,从基因水平对细菌种类的鉴定成为最精确最可靠的方法,当前用于双歧杆菌的分类和鉴定主要有以下基因。
Tuf基因:在物种的鉴定方面tuf基因表现出极好的特性,这是因为它具有高度的保守性和普遍存在性[1-2]。作为一个适当的种系marker,此基因具有优越的前提条件,如高遗传稳定性和普遍性[3],它可以避免出现与rRNA的相近性,可避免对于拥有相似不同核苷酸种类的亲缘关系的过高评价,还可避免在不同位点中取代模型的非独立性,及微生物中不同G+C含量的偏移等这些问题[4]。在双歧杆菌中,tuf基因属于一个大的转录单位str操纵子,这个操纵子编码许多核糖体蛋白和相关蛋白。经测定在长双歧杆菌NCC2705中tuf基因为4.8kb,位于fusA基因(翻译延伸因子G)、rpsG基因(30S核糖体蛋白S7)和rpsL基因(30S核糖体蛋白S12)的下游,一个尚未鉴定的开放读码框的上游。在对多种双歧杆菌的tuf基因的序列多重对比中我们发现,在相同种类中,tuf基因有很高的保守性,而在种间这种保守性相对来说不高,双歧杆菌中tuf基因的一致性为89%~97%。Tuf基因编码EF-Tu蛋白,EF-TU是一种延伸因子,在蛋白质合成中起着重要作用,它的二级结构包括Ⅰ区域中的4个α螺旋和两个β片层,整个Ⅱ区域,Ⅲ区域中的N-末端部分[5],这些结构的确定是根据大肠杆菌中EF-TU的结构而推测的,与其他细菌的EF-Tu比较发现,双歧杆菌EF-TU蛋白质的氨基酸有高度的保守性[6] ......
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