胚胎大鼠大脑额叶皮质神经干细胞的分离、培养与鉴定
神经干细胞;纯化;诱导分化；大鼠,,]神经干细胞;纯化;诱导分化；大鼠,1材料与方法,2结果,3讨论,[参考文献]
[摘要]目的:探讨从胚胎大鼠大脑额叶皮质分离培养神经干细胞(neural stem cell, NSCs)的方法及NSCS的特性。方法:将145d胎龄的大鼠额叶皮质脑组织制备成单细胞悬液，于含EGF 和bFGF 的DMEM/F12无血清培养液中培养,形成原代细胞球后，进行单细胞克隆传代扩增。 免疫荧光组化方法检测克隆球Nestin、Map2、 GFAP抗体标记情况。结果:原代培养2周后，可形成大量悬浮生长的神经球，BrdU和Nestin检测呈阳性，诱导分化后呈Map2、GFAP阳性。 结论:可从胚鼠脑皮质中分离培养纯化、扩增传代获得NSCs，经诱导后可以分化为神经元和星形胶质细胞，可作为细胞替代治疗中枢神经系统疾病的供体来源。[关键词]神经干细胞;纯化;诱导分化；大鼠
神经系统创伤、缺血及退行性疾病的治疗一直是困扰医学界的一个难题。人和哺乳动物体内及胚胎体内神经干细胞(neural stem cells, NSCs)的发现, 为解决这一难题点燃了新的希望。目前，众多学者从各种途径探索治疗神经系统疾病的生物材料及治疗方法[12]。NSCs是一类具有自我更新和多向分化潜能的特殊细胞。利用它不仅可以探讨神经系统发育的分子机制,也可作为细胞移植治疗中枢神经系统损伤、退行性疾病及脑肿瘤等疾病。胚胎期的NSCs 主要位于纹状体、大脑皮质、视网膜以及脊髓等部位[1,3]，目前利用细胞培养技术已经成功地从上述部位分离出多潜能NSCs。尽管NSCs 是未分化细胞,不同来源的NSCs 之间仍有差别。与中脑及脊髓起源的NSCs相比,纹状体及皮质NSCs 更适合于细胞移植替代那些因脑内疾病受损的神经元[4]。本研究以胚胎大鼠为供体,采用单细胞克隆技术选择性分离探索了大脑额叶皮质NSCs的纯化、标记、不同诱导分化方法及鉴定技术,为进一步研究NSCs 的生物学特性和NSCs移植替代治疗神经系统疾病提供生物材料及方法。
1 材料与方法
11 材料145 d 胎龄的SD大鼠由东南大学动物实验中心提供。DMEM/F12培养基为Invitrogen公司产品，B27辅助培养基、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF) 及表皮细胞生长因子(epidermal growth factor, EGF) 均为Gibco 公司产品, 兔抗大鼠Map2和兔抗大鼠GFAP 抗体购自美国R&D 公司, 其他免疫组化试剂购自北京中山公司 ......
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