胃癌细胞系MKN 中HLAⅠ类分子表达降低的机制研究
胃癌；HLAⅠ类分子；微卫星序列,,]胃癌；HLAⅠ类分子；微卫星序列,胃癌细胞系MKN中HLAⅠ类分子表达降低的机制研究,1材料与方法,2结果,3讨论,[参考文献]
[摘要]目的:探讨胃癌细胞系MKN中HLAⅠ类抗原表达水平异常的分子机制。方法：以胃癌细胞系BGC823、MGC803和SGC7901为对照，利用流式细胞仪检测细胞表面HLAⅠ类复合物的表达情况，Western blot检测HLAⅠ类分子重链及轻链表达情况，半定量RTPCR检测HLAⅠ类分子重链、轻链和抗原加工分子mRNA水平的表达情况，并利用HLA基因区域的微卫星序列检测MKN细胞HLA基因在DNA水平的完整性。结果：胃癌细胞系MKN表面HLAⅠ类复合物表达降低，重链A及B/C位点蛋白无表达而轻链表达无异常。在mRNA水平，胃癌细胞系MKN存在重链A、B、C各位点和抗原加工分子TAP1、LMP2、Tapasin、PA28β的表达缺失。微卫星DNA扩增结果初步显示，MKN细胞无HLA基因区域DNA的大片段丢失。结论：胃癌细胞系MKN HLAⅠ类分子复合物表达降低可能是由HLAⅠ类分子重链及其加工分子在转录水平改变而引起的。[关键词]胃癌；HLAⅠ类分子；微卫星序列
在许多人类肿瘤中发现人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)Ⅰ类分子的表达下调和丢失，这是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的重要途径之一，也是临床T细胞依赖性免疫治疗的关键障碍[1]。HLAⅠ类分子抗原加工途径中的任何缺陷均可导致细胞表面HLAⅠ类分子—抗原肽复合物表达缺陷[2]。我们已证实胃癌组织标本有明显的HLAⅠ类分子表达下调或缺失，说明胃癌是一类免疫原性较弱的肿瘤[3]。为进一步探讨其机制，作者研究了4株胃癌细胞系HLAⅠ类及其相关分子的表达情况，寻找导致表达下调和丢失的具体原因。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 肿瘤细胞系 胃癌细胞系BGC823、MGC803购自中国科学院上海细胞研究所，胃癌细胞系SGC7901、MKN由东南大学生物科学与医学工程系惠赠。
1.1.2 抗体 流式细胞检测所用PE标记的鼠抗人HLAABC抗体(PHARMINGEN) 购自晶美公司。Western blot所用鼠单抗为美国Soldano Ferrone博士(Roswell Park Cancer Institute, Buffalo, NY ,USA)惠赠。其中HC10 (抗HLAB，C重链)和HCA2(抗HLAA重链)的工作浓度均为1∶1 000，L368(抗HLA轻链)的工作浓度为1∶500 ......
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