阿尔茨海默病；重组疫苗；表位；表面呈现；抗原性_

抗阿尔茨海默病重组蛋白疫苗的克隆、表达和免疫学鉴定

http://www.100md.com 《东南大学学报(医学版)》 2006年第4期

阿尔茨海默病；重组疫苗；表位；表面呈现；抗原性,,]阿尔茨海默病；重组疫苗；表位；表面呈现；抗原性,1材料与方法,2结果,3讨论,[参考文献]

     [摘要]目的:制备抗阿尔茨海默病的重组蛋白疫苗。方法:将β淀粉样蛋白42肽N端表位Aβ115基因，通过来源于破伤风毒素的辅助性T细胞表位多肽TTP基因片段，与大肠杆菌L门冬酰胺酶Ⅱ(AnsB)基因的C末端融合，构建表达质粒pET28aAnsBTTPAβ115。转化至E. coli BL21，TBYE培养基(Kanr)培养，乳糖诱导表达，通过渗透休克、DEAE52cellulose和Sephadex G-100柱层析制备融合蛋白rAnsBTTPAβ115，通过酶活力和抗原性测定鉴定融合蛋白。结果:获得的融合蛋白rAnsBTTPAβ115保留了AnsB 71%的催化活力，具有与抗Aβ142抗体特异性结合的能力。结论:获得了在AnsB多聚酶分子表面呈现有Aβ115表位的融合蛋白rAnsBTTPAβ115,为抗阿尔茨海默病疫苗研究奠定了基础。

    [关键词]阿尔茨海默病；重组疫苗；表位；表面呈现；抗原性

    阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一种神经退行性疾病[1]，缺乏行之有效的治疗方法[2]。神经病理研究表明,β淀粉样蛋白42肽(Aβ142)的形成和聚集以及以其为核心形成的老年斑是AD发病的关键[2]。用人Aβ142肽免疫转基因小鼠模型引发的针对Aβ的自身免疫反应能有效减轻脑内Aβ的沉积，阻止老年斑的形成，明显改善记忆、认知和行为能力[3]。其临床研究也显示出良好的疗效，但有受试者出现中枢神经炎症状。Leverone等[4]证明N端15肽(Aβ115, DAEFRHDSGYEVHHQ)是Aβ142的B细胞表位，以其作为免疫原能够避免全肽免疫导致的不良反应，但是其免疫原性很弱，不利于诱导老年患者产生保护性免疫反应。提高B细胞表位的免疫原性是AD疫苗设计的关键[5]。大肠杆菌L门冬酰胺酶Ⅱ(LasparaginaseⅡ，Ans B)是由4个相同亚基组成的蛋白酶。我们曾用来源于破伤风毒素的辅助性T细胞表位多肽(tetanus toxin peptide, TTP; QYIKANSKFIGITELIYSYFPSVI)作为空间连接肽将人胆固醇脂转移蛋白C端的表位CETPC融合表达在AnsB的C端下游，发现AnsB能够作为表位多肽的呈现载体[6]。本研究试图获得表面呈现有Aβ115的重组嵌合酶融合蛋白AnsBTTPAβ115，利用AnsB的多聚化倾向[7]和TTP的免疫辅助功能来提高Aβ115的免疫原性，以期免疫后能够产生较强的体液免疫，进而达到安全有效防治AD的目的。

     1 材料与方法 ......

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