川大成功建立人新基因PCIA1细胞株
本报四川讯 近日，四川大学华西医院、生物治疗国家重点实验室和肿瘤中心的王瑞、邓洪新等研究人员，以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)总RNA为模板，采用RT-PCR扩增转染技术，成功建立一人新基因PCIA1细胞株。该细胞株被命名为PCIA1基因，基因cDNA全长为1086bp，编码一个102个氨基酸的蛋白质，其在基因库中的序列号为AY563006。
据介绍，至2003年底人类基因组计划已经完成，但大多数基因功能未知。因此，克隆新基因并阐明其功能及基因间的相互作用，是目前研究人员面临的新课题和新挑战。
近年来，王瑞等研究人员在探讨人的新基因中，以HUVEC总RNA为模板，通过引物设计、RT-PCR扩增、重组真核表达载体构建、HeLa细胞基因转染及G418抗性基因筛选等一系列技术处理后，从而成功地构建出一转染稳定的“人新基因PCIA1细胞株”。
该细胞株经RT-PCR检测和重组质粒酶切鉴定显示：HUVEC总RNA扩增物电泳，可见约309bp处有一特异性扩增条带，与预期扩增片段大小相符；重组pcDNA-PCIA1经测序证实，插入片段为PCIA1扩增片段，且插入方向正确，PCIA1基因已稳定转染到HeLa细胞中，并表达PCIA1蛋白。同时，免疫印迹分析还发现，PCIA1基因转染的HeLa细胞的裂解物可见到特异性带，其亮度大于空质粒转染及未转染的HeLa细胞。提示真核表达重组质粒pcDNA-PCIA1构建成功，其PCIA1新基因转染稳定，表达广泛，特异性强。
研究人员认为，PCIA1基因位于人的染色体19p13.2-p13.1之间，是一个单拷贝基因。在不同的物种中，它的编码区序列非常保守，其结构特征十分独特，它没有跨膜区，也没有信号肽序列，不是膜蛋白，也不是分泌蛋白，可能位于细胞核内。同时，免疫组织化学实验发现，PCIA1基因所表达的蛋白主要在核内，推断其可能是一个核内的因子。由于该基因分布广泛，在基因进化过程中非常保守，因此可能是一个对细胞生长非常重要的基因。PCIA1基因的成功建立，不仅为深入研究基因生物学功能奠定了基础，也拓展了肿瘤的基因治疗前景。
(吴一福), 百拇医药
据介绍，至2003年底人类基因组计划已经完成，但大多数基因功能未知。因此，克隆新基因并阐明其功能及基因间的相互作用，是目前研究人员面临的新课题和新挑战。
近年来，王瑞等研究人员在探讨人的新基因中，以HUVEC总RNA为模板，通过引物设计、RT-PCR扩增、重组真核表达载体构建、HeLa细胞基因转染及G418抗性基因筛选等一系列技术处理后，从而成功地构建出一转染稳定的“人新基因PCIA1细胞株”。
该细胞株经RT-PCR检测和重组质粒酶切鉴定显示：HUVEC总RNA扩增物电泳，可见约309bp处有一特异性扩增条带，与预期扩增片段大小相符；重组pcDNA-PCIA1经测序证实，插入片段为PCIA1扩增片段，且插入方向正确，PCIA1基因已稳定转染到HeLa细胞中，并表达PCIA1蛋白。同时，免疫印迹分析还发现，PCIA1基因转染的HeLa细胞的裂解物可见到特异性带，其亮度大于空质粒转染及未转染的HeLa细胞。提示真核表达重组质粒pcDNA-PCIA1构建成功，其PCIA1新基因转染稳定，表达广泛，特异性强。
研究人员认为，PCIA1基因位于人的染色体19p13.2-p13.1之间，是一个单拷贝基因。在不同的物种中，它的编码区序列非常保守，其结构特征十分独特，它没有跨膜区，也没有信号肽序列，不是膜蛋白，也不是分泌蛋白，可能位于细胞核内。同时，免疫组织化学实验发现，PCIA1基因所表达的蛋白主要在核内，推断其可能是一个核内的因子。由于该基因分布广泛，在基因进化过程中非常保守，因此可能是一个对细胞生长非常重要的基因。PCIA1基因的成功建立，不仅为深入研究基因生物学功能奠定了基础，也拓展了肿瘤的基因治疗前景。
(吴一福), 百拇医药