不稳定型心绞痛病人β-血小板球蛋白浓度的检测
[摘要]目的 检测不稳定型心绞痛(UA)病人在标准药物治疗前后β-血小板球蛋白(β-TG)浓度、血小板计数(PLT)、血小板平均体积(MPV)和巨大血小板(LPLT)数量。方法 UA病人(UA组)66例被分为两组:A组42例有过心绞痛病史;B组24例为初发性心绞痛。以22例健康人为对照。β-TG及其他活化标志物分别在治疗前测量(A组和B组)以及治疗8～10 d后测量(B组)。结果 A组及B组(治疗前后)血浆β-TG浓度比对照组明显升高，具有统计学意义( F=34.17，q=9.837～13.457，P <0.05)。UA组LPLT数量比对照组显著升高( F=21.49， q= 9.468～10.619，P <0.05)，而治疗对于PLT和MPV无影响( P >0.05)。结论 UA病人的β-TG和LPLT浓度由于血小板活化而升高，正规的临床治疗未能明显引起β-TG和其他活化标志物量的变化。
[关键词] 心绞痛，不稳定型;血小板活化;β-血小板膜糖蛋白类
DETECTION OF BETA-THROMBOGLOBULIN IN PATIENTS WITH UNSTABLE ANGINA
DING FA-MING， ZHANG XIN-LI， SHANG YAN-CHANG， et al
(Department of Cardiology， The Second Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College， Qingdao 266042，China)
[ABSTRACT]ObjectiveTo assess the plasma concentrations of β-TG， PLT， MPV and LPLT in patients with unstable an-gina before and after standard drug therapy. MethodsThis study consisted of 66 patients with unstable angina， who were divid-ed into two groups: Group A， 42 patients with a history of angina， and group B， 24 patients with a new-onset unstable angina. β-TG and platelet activation markers were measured at baseline (groups A and B) and after 8-10 days of standard therapy for unsta-ble angina (group B). The control group consisted of 22 healthy subjects . ResultsThe mean β-TG concentrations in groups A and B before and after treatment were significantly higher than in the controls ( F=34.17， q=9.837-13.457，P <0.05). In pa-tients with unstable angina， the PLT and MPV values were not affected by the therapy ( P >0.05) and were similar to those ob-tained in the controls， whereas the LPLT value was significantly higher than in the controls ( F=21.49，q=9.468-10.619，P < 0.05 ). ConclusionConcentrations of β-TG and LPLT are increased in patients with unstable angina due to platelet activation. The introduction of standard treatment for unstable angina does not significantly change β-TG and platelet activation markers.
[KEY WORDS]angina， unstable; platelet activation; platelet membrane glycoproteins
β-血小板球蛋白(β-TG)是一种特殊的蛋白，正常情况下β-TG只能以原型状态微量存在，血小板活化过程中β-TG被释放[1，2]。血小板活化程度间接指标包括血小板数量(PLT)、血小板平均体积(MPV)和巨大血小板(LPLT)的百分比等[3，4]。虽然抗心绞痛药物作用机制已得到充分论证，但在缺血性心脏病(IHD)病人中应用这些药物对血浆β-TG浓度影响仍没有明确结论。本研究旨在评价正规治疗对于不稳定型心绞痛(UA)病人β-TG浓度和间接激活标志物的影响。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2001年12月～2005年6月我院心内科确诊(依据Braun Wald分类及诊断标准)的UA病人66例，男42例，女24例;平均年龄(64.6±12.4) 岁。入院前未接受过正规的抗心绞痛治疗。将病人分为两组:A组42例病人既往有心绞痛史，B组24例病人为第一次出现UA症状，未接受过他汀类药物治疗。对照组为22例健康查体者，其中男14例，女8例，平均年龄(62.8±10.1)岁，既往没有心血管疾患及栓塞事件。
1.2 方法
1.2.1治疗方法 B组病人给予标准药物治疗 8～ 10 d，包括非类固醇类止痛药及吗啡，静脉应用硝酸酯类药、低分子肝素及β受体拮抗剂。
1.2.2β-TG浓度测定 A、B组在胸痛发作后即刻、标准治疗前抽取血标本，B组病人标准药物治疗后再次取血检查。每例病人抽取4.5 mL血标本，注入加有CTAD抗凝剂的Vacationer试管中。冰上静置30 min后，2 000 r/min离心30 min，将获得的富含血小板的血浆-20 ℃保存备用。应用酶联免疫法(ELISA)检测β-TG浓度。显色后，在酶标 仪上测定吸光度值，通过绘制标准曲线求得标本 β- TG浓度。
1.2.3血小板形态学指标测量 取2 mL静脉血，经EDTA抗凝后，应用Technician H-1系统检测PLT、MPV和LPLT。体积超过20 fL为LPLT。
1.2.4统计学分析 应用SPSS 11.5统计软件进行统计分析，数据用 x±s表示，多个样本均数比较采用F检验，其两两比较采用q 检验。
2 结果
2.1 β-TG浓度检测 对照组β-TG浓度为(10.3±2.7)×103U/L，A组为(17.6±4.3)×103U/L，B组治疗前后β-TG的浓度分别为(19.6±3.6)×103U/L和(21.5± 4.7)× 10 3U/L。A组及B组治疗前后血浆β-TG浓度比对照组明显升高，差异具有统计学意义( F= 34.17 ， q= 9.837～ 13.457，P <0.05)。A组与B组治疗前后比较差异无显著性( P >0.05)。
2.2 血小板形态学指标 UA组的LPLT数量比对照组显著升高( F= 21.49 ，q=9.468～10.619，P <0.05)，而治疗对于PLT和MPV无影响( P >0.05)。见表1。
表1 各组PLT、MPV及LPLT比较(略)
3 讨论
目前研究表明，动脉粥样硬化斑块破裂是导致不稳定型心绞痛病人血小板活化的主要原因[1，2]，斑块破裂导致血管内皮连贯性中断，使血小板与组织因子和胶原物质相接触而引发血小板活化。活化导致α颗粒膜与质膜融合，使血小板内部的颗粒成分被释放，其中包括血小板基蛋白(PBP)及其衍生物，如血小板因子4(PF4)、β-TG等[2]。位于血小板α颗粒膜上的GMP-140只在活化型血小板膜表面大量表达，也是反映血小板活化程度的特异性探针[5]。本研究表明，不稳定型心绞痛病人，动脉粥样硬化斑块破裂处存在血小板活化，血栓形成，以及缩血管物质如血栓素、5-羟色胺等释放。β-TG和其他一些间接指标如血小板形态学参数等指标是血小板活化标志物。 本文结果显示，与对照组相比，UA组病人血浆β-TG浓度明显升高。这与ULUTIN等[2]的研究结果一致。MUNDAL等[6]提出测定尿中β-TG浓度对于评价病人血小板活化程度有帮助。研究发现，病人血和尿β-TG浓度均升高，但缺乏线性关系。DYMICKA-PIEKARSKA等[7]研究表明，在急性心肌梗死病人中血浆β-TG浓度存在动态变化，即心肌梗死后第1天升高，第3天降低，第15天后重新升高。其变化原因是由于在心肌梗死早期血小板活化，随后血小板在骨髓中再生所致。目前已经明确血小板活化可发生在多种机体失衡状态，例如急性心肌梗死、瓣膜植入术后、静脉血栓、肾衰竭、高脂血症、妊娠、乙醇摄入后等。血小板形态学参数检查亦有利于评价血小板的功能。本研究显示，与对照组相比，UA病人PLT明显降低，这一结果与BATH等[3]的报道相似，然而SANERAN等[4]研究表明，在心肌梗死和UA病人中PLT非显著性升高。MPV和LPLT是评估病人的血小板形态的又一重要指标。ENDLER等[8]研究表明，MPV的明显增加提示血小板活化，即血小板体积越大，活性越强，并推测MPV在11.6 fL以上是急性心肌梗死的一个危险因素。本研究没有发现两组MPV存在差别，但LPLT确有显著差异。依据BROWN的理论，巨大血小板有更强的反应性，产生更多的血栓素，包含更多的致密体，更易于与胶原物质或ADP媒介刺激反应，从而释放更多的β-TG。本研究没发现标准治疗对β-TG浓度有影响。HURLEN等[9]则报道，应用阿司匹林可降低β-TG浓度。SALVI-ONI等[10]认为，心肌梗死病人接受溶栓治疗时，阿司匹林对血小板活化的影响还未产生。目前观点认为，在急性冠状动脉综合征中应该给予乙酰水杨酸治疗，其能通过抑制环氧化酶的合成以及阻碍血栓素A2 的形成，来削弱血小板的聚集，10 d后具有酶活性的新生血小板才能够产生并发挥作用。然而，乙酰水杨酸并不影响血小板黏附与颗粒释放[1]，我们的研究也没有发现乙酰水杨酸对血小板参数的任何影响。综上所述，在UA病人中，血小板活化导致β-TG浓度和巨大血小板比例升高，标准的临床治疗对于β-TG浓度和血小板形态学指标没有显著的影响。虽然在急性冠状动脉综合征形成过程中，血小板活化具有非常重要的意义，但是其活化的确切机制仍需进一步研究。
[参考文献]
[1] FUSTER V， BADIMON L， BADIMON J J， et al. The patho-genesis of coronary artery disease and the acute coronary syn-drome [J]. N Engl Med， 1992，356:242-250.
[2] ULUTIN T， SONMEZ H， UCISIK N， et al. The molecular markers of hemostatic activation on coronary artery disease [J]. Thromb Res， 1997， 88:329-332.
[3] BATH P M W， BUTTERWORTH R J. Platelet size: mea- surement ， physiology and vascular disease [J]. Blood Coagu-lation and Fibrinolysis， 1996，7:157-161.
[4] SENARAN H， ILERI M， ALTINBAS A， et al. Throm- bopoie -tin and mean platelet volume in coronary artery disease [J]. Clin Cardiol， 2001，24:405-408.
[5] 姜 忠信，刘成玉，谭齐贤. 冠心病病人血栓前状态分子标志物及临床应用[J].齐鲁医学杂志，2001，16(3):259-261.
[6] MUNDAL H H， HJEMDAHL P， URDAL P， et al. Beta-thromboglobulin in urine and plasma: influence of coronaryrisk factors [J]. Thromb Res， 1998，90:229-237.
[7] DYMICKA -PIEKARSKA V， KEMONA H， MANTUR M， et al. β-thromboglobulin in patients with acute myocardial in-farction according to the treatment[J]. Rocz Akad Med Bia-lystok， 2001，46:145-152.
[8] ENDLER G， KLIMESCH A， SUNDER-PLASSMANN H， et al. Mean platelet volume is an independent risk factor for myo-cardial infarction but not for coronary artery disease [J]. Br J Haematol， 2002，117:399-404.
[9] HURLEN M， SELJEFLOT I， ARNESEN H. Increased platelet aggregation ability during exercise in patients with pre-vious myocardial infarction. Lack of inhibition by aspirin [J]. Thromb Res， 2000，99:487-494.
[10] SALVIONI A， PEREGO G B， MARENZI G， et al. Platelet activity in early stage of acute myocardial infarction: relation to time of presentation， treatment with either tissue plasmino-gen activator or streptokinase and cyclooxygenase inhibition[J]. Thromb Thrombolysis， 1998，5:65-71.
(本文编辑 马伟平)
(青岛市中心医院心内科，山东 青岛 266042; 青岛市经济技术开发区第一人民医院内科; 青岛市市立医院神经内科), 百拇医药(丁发明，张新丽，尚延昌，李洪华)
[关键词] 心绞痛，不稳定型;血小板活化;β-血小板膜糖蛋白类
DETECTION OF BETA-THROMBOGLOBULIN IN PATIENTS WITH UNSTABLE ANGINA
DING FA-MING， ZHANG XIN-LI， SHANG YAN-CHANG， et al
(Department of Cardiology， The Second Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College， Qingdao 266042，China)
[ABSTRACT]ObjectiveTo assess the plasma concentrations of β-TG， PLT， MPV and LPLT in patients with unstable an-gina before and after standard drug therapy. MethodsThis study consisted of 66 patients with unstable angina， who were divid-ed into two groups: Group A， 42 patients with a history of angina， and group B， 24 patients with a new-onset unstable angina. β-TG and platelet activation markers were measured at baseline (groups A and B) and after 8-10 days of standard therapy for unsta-ble angina (group B). The control group consisted of 22 healthy subjects . ResultsThe mean β-TG concentrations in groups A and B before and after treatment were significantly higher than in the controls ( F=34.17， q=9.837-13.457，P <0.05). In pa-tients with unstable angina， the PLT and MPV values were not affected by the therapy ( P >0.05) and were similar to those ob-tained in the controls， whereas the LPLT value was significantly higher than in the controls ( F=21.49，q=9.468-10.619，P < 0.05 ). ConclusionConcentrations of β-TG and LPLT are increased in patients with unstable angina due to platelet activation. The introduction of standard treatment for unstable angina does not significantly change β-TG and platelet activation markers.
[KEY WORDS]angina， unstable; platelet activation; platelet membrane glycoproteins
β-血小板球蛋白(β-TG)是一种特殊的蛋白，正常情况下β-TG只能以原型状态微量存在，血小板活化过程中β-TG被释放[1，2]。血小板活化程度间接指标包括血小板数量(PLT)、血小板平均体积(MPV)和巨大血小板(LPLT)的百分比等[3，4]。虽然抗心绞痛药物作用机制已得到充分论证，但在缺血性心脏病(IHD)病人中应用这些药物对血浆β-TG浓度影响仍没有明确结论。本研究旨在评价正规治疗对于不稳定型心绞痛(UA)病人β-TG浓度和间接激活标志物的影响。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2001年12月～2005年6月我院心内科确诊(依据Braun Wald分类及诊断标准)的UA病人66例，男42例，女24例;平均年龄(64.6±12.4) 岁。入院前未接受过正规的抗心绞痛治疗。将病人分为两组:A组42例病人既往有心绞痛史，B组24例病人为第一次出现UA症状，未接受过他汀类药物治疗。对照组为22例健康查体者，其中男14例，女8例，平均年龄(62.8±10.1)岁，既往没有心血管疾患及栓塞事件。
1.2 方法
1.2.1治疗方法 B组病人给予标准药物治疗 8～ 10 d，包括非类固醇类止痛药及吗啡，静脉应用硝酸酯类药、低分子肝素及β受体拮抗剂。
1.2.2β-TG浓度测定 A、B组在胸痛发作后即刻、标准治疗前抽取血标本，B组病人标准药物治疗后再次取血检查。每例病人抽取4.5 mL血标本，注入加有CTAD抗凝剂的Vacationer试管中。冰上静置30 min后，2 000 r/min离心30 min，将获得的富含血小板的血浆-20 ℃保存备用。应用酶联免疫法(ELISA)检测β-TG浓度。显色后，在酶标 仪上测定吸光度值，通过绘制标准曲线求得标本 β- TG浓度。
1.2.3血小板形态学指标测量 取2 mL静脉血，经EDTA抗凝后，应用Technician H-1系统检测PLT、MPV和LPLT。体积超过20 fL为LPLT。
1.2.4统计学分析 应用SPSS 11.5统计软件进行统计分析，数据用 x±s表示，多个样本均数比较采用F检验，其两两比较采用q 检验。
2 结果
2.1 β-TG浓度检测 对照组β-TG浓度为(10.3±2.7)×103U/L，A组为(17.6±4.3)×103U/L，B组治疗前后β-TG的浓度分别为(19.6±3.6)×103U/L和(21.5± 4.7)× 10 3U/L。A组及B组治疗前后血浆β-TG浓度比对照组明显升高，差异具有统计学意义( F= 34.17 ， q= 9.837～ 13.457，P <0.05)。A组与B组治疗前后比较差异无显著性( P >0.05)。
2.2 血小板形态学指标 UA组的LPLT数量比对照组显著升高( F= 21.49 ，q=9.468～10.619，P <0.05)，而治疗对于PLT和MPV无影响( P >0.05)。见表1。
表1 各组PLT、MPV及LPLT比较(略)
3 讨论
目前研究表明，动脉粥样硬化斑块破裂是导致不稳定型心绞痛病人血小板活化的主要原因[1，2]，斑块破裂导致血管内皮连贯性中断，使血小板与组织因子和胶原物质相接触而引发血小板活化。活化导致α颗粒膜与质膜融合，使血小板内部的颗粒成分被释放，其中包括血小板基蛋白(PBP)及其衍生物，如血小板因子4(PF4)、β-TG等[2]。位于血小板α颗粒膜上的GMP-140只在活化型血小板膜表面大量表达，也是反映血小板活化程度的特异性探针[5]。本研究表明，不稳定型心绞痛病人，动脉粥样硬化斑块破裂处存在血小板活化，血栓形成，以及缩血管物质如血栓素、5-羟色胺等释放。β-TG和其他一些间接指标如血小板形态学参数等指标是血小板活化标志物。 本文结果显示，与对照组相比，UA组病人血浆β-TG浓度明显升高。这与ULUTIN等[2]的研究结果一致。MUNDAL等[6]提出测定尿中β-TG浓度对于评价病人血小板活化程度有帮助。研究发现，病人血和尿β-TG浓度均升高，但缺乏线性关系。DYMICKA-PIEKARSKA等[7]研究表明，在急性心肌梗死病人中血浆β-TG浓度存在动态变化，即心肌梗死后第1天升高，第3天降低，第15天后重新升高。其变化原因是由于在心肌梗死早期血小板活化，随后血小板在骨髓中再生所致。目前已经明确血小板活化可发生在多种机体失衡状态，例如急性心肌梗死、瓣膜植入术后、静脉血栓、肾衰竭、高脂血症、妊娠、乙醇摄入后等。血小板形态学参数检查亦有利于评价血小板的功能。本研究显示，与对照组相比，UA病人PLT明显降低，这一结果与BATH等[3]的报道相似，然而SANERAN等[4]研究表明，在心肌梗死和UA病人中PLT非显著性升高。MPV和LPLT是评估病人的血小板形态的又一重要指标。ENDLER等[8]研究表明，MPV的明显增加提示血小板活化，即血小板体积越大，活性越强，并推测MPV在11.6 fL以上是急性心肌梗死的一个危险因素。本研究没有发现两组MPV存在差别，但LPLT确有显著差异。依据BROWN的理论，巨大血小板有更强的反应性，产生更多的血栓素，包含更多的致密体，更易于与胶原物质或ADP媒介刺激反应，从而释放更多的β-TG。本研究没发现标准治疗对β-TG浓度有影响。HURLEN等[9]则报道，应用阿司匹林可降低β-TG浓度。SALVI-ONI等[10]认为，心肌梗死病人接受溶栓治疗时，阿司匹林对血小板活化的影响还未产生。目前观点认为，在急性冠状动脉综合征中应该给予乙酰水杨酸治疗，其能通过抑制环氧化酶的合成以及阻碍血栓素A2 的形成，来削弱血小板的聚集，10 d后具有酶活性的新生血小板才能够产生并发挥作用。然而，乙酰水杨酸并不影响血小板黏附与颗粒释放[1]，我们的研究也没有发现乙酰水杨酸对血小板参数的任何影响。综上所述，在UA病人中，血小板活化导致β-TG浓度和巨大血小板比例升高，标准的临床治疗对于β-TG浓度和血小板形态学指标没有显著的影响。虽然在急性冠状动脉综合征形成过程中，血小板活化具有非常重要的意义，但是其活化的确切机制仍需进一步研究。
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[1] FUSTER V， BADIMON L， BADIMON J J， et al. The patho-genesis of coronary artery disease and the acute coronary syn-drome [J]. N Engl Med， 1992，356:242-250.
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[3] BATH P M W， BUTTERWORTH R J. Platelet size: mea- surement ， physiology and vascular disease [J]. Blood Coagu-lation and Fibrinolysis， 1996，7:157-161.
[4] SENARAN H， ILERI M， ALTINBAS A， et al. Throm- bopoie -tin and mean platelet volume in coronary artery disease [J]. Clin Cardiol， 2001，24:405-408.
[5] 姜 忠信，刘成玉，谭齐贤. 冠心病病人血栓前状态分子标志物及临床应用[J].齐鲁医学杂志，2001，16(3):259-261.
[6] MUNDAL H H， HJEMDAHL P， URDAL P， et al. Beta-thromboglobulin in urine and plasma: influence of coronaryrisk factors [J]. Thromb Res， 1998，90:229-237.
[7] DYMICKA -PIEKARSKA V， KEMONA H， MANTUR M， et al. β-thromboglobulin in patients with acute myocardial in-farction according to the treatment[J]. Rocz Akad Med Bia-lystok， 2001，46:145-152.
[8] ENDLER G， KLIMESCH A， SUNDER-PLASSMANN H， et al. Mean platelet volume is an independent risk factor for myo-cardial infarction but not for coronary artery disease [J]. Br J Haematol， 2002，117:399-404.
[9] HURLEN M， SELJEFLOT I， ARNESEN H. Increased platelet aggregation ability during exercise in patients with pre-vious myocardial infarction. Lack of inhibition by aspirin [J]. Thromb Res， 2000，99:487-494.
[10] SALVIONI A， PEREGO G B， MARENZI G， et al. Platelet activity in early stage of acute myocardial infarction: relation to time of presentation， treatment with either tissue plasmino-gen activator or streptokinase and cyclooxygenase inhibition[J]. Thromb Thrombolysis， 1998，5:65-71.
(本文编辑 马伟平)
(青岛市中心医院心内科，山东 青岛 266042; 青岛市经济技术开发区第一人民医院内科; 青岛市市立医院神经内科), 百拇医药(丁发明，张新丽，尚延昌，李洪华)