HPLC测定复方加替沙星滴眼液中加替沙星的含量
http://www.100md.com
2007年1月21日
王延东，唐细兰，叶成添，吴伟 (中山大学中山眼科中心，广州 510060)
摘要 目的 建立测定复方加替沙星滴眼液中加替沙星含量的高效液相色谱法。方法 采用Hypersil ODS C18柱(5m，4.6mm×200mm)为色谱柱，流动相为1%三乙胺溶液(磷酸调pH至4.5)-乙腈(86:14，v/v)，流速为0.9ml•min-1，检测波长325nm，柱温50℃。结果 加替沙星线性范围为7.5～240g•ml-1，r＝0.9999；平均回收率为99.7%，RSD＝0.40%。结论 该方法简便、快速、灵敏，可作为该制剂含量测定的有效方法。
关键词 高效液相色谱法；加替沙星；滴眼液；含量测定
HPLC determination of gatifloxacin in compound gatifloxacin eye drop
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Wang Yandong, Tang Xilan, Ye Chengtian, Wu Wei
(Zhongshan Ophthalmic center of Sun Yat-sen university, guangzhou 510060)
ABSTRACT OBJECTIVE To establish an HPLC method for the determination of gatifloxacin in compound gatifloxacin eye drop. METHODS The analytical column was Hypersil ODS C18 (5m，4.6mm×200mm), the mobile phas was composed of 1% triethylamine solution and acetonitrile(86/14,V/V) with the flow rate of 0.9ml/min, the detection wavelength was 325nm and column temperature was 50℃.RESULTS The calibration curve was linear within the concentration range of 7.5～240 g•ml-1，r＝0.9999.The average recovery of gatifloxacin was 99.7%,(RSD=0.40%). CONCLUSION The method is simple,rapid and accurate.It is suitable for the determination of the content of gatifloxacin in compound gatifloxacin eye drop.
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KEY WORDS HPLC;gatifloxacin;eye drop;content determination
加替沙星(Gatifloxacin, GTFX)属第4代氟喹诺酮类合成抗菌药，其8位甲氧基的引入，使之比以往同类药物对革兰阳性菌的抗菌作用更强。它不仅弥补了环丙沙星、氧氟沙星等第3代氟喹诺酮类药物对G-菌、G+菌、厌氧菌、支原体、衣原体及分枝杆菌等活性较弱的缺点，对这些病原体均具有较好的抗菌作用，而且几乎没有潜在的光敏副作用[1-2]。目前临床上常用剂型多为注射液和口服制剂，为拓宽其使用范围，本院制剂室制备了复方加替沙星滴眼液。为了加强质量控制，我们通过反相高效液相色谱法(HPLC)建立了复方加替沙星滴眼液中加替沙星的含量测定方法。
1 仪器与试药
1.1 药品与试剂
加替沙星对照品(批号：060608，99.2%)由宣城精方医药化工有限公司提供，复方加替沙星滴眼液由中山大学附属眼科医院制剂室提供，乙腈为色谱纯，三乙胺和磷酸为分析纯。
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1.2 仪器
Agilent 1100高效液相色谱仪：包括G1314A紫外检测器，G1316A柱温箱，G1329A带温控自动进样器，G1311A四元泵，G1322A真空脱气机(美国安杰伦公司)；Agilent 1100化学工作站。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS C18(5m，4.6mm×200mm)；流动相为1%三乙胺溶液(磷酸调pH至4.5)-乙腈(86:14，v/v)，流速为0.9ml•min-1，检测波长325nm，柱温50℃，进样量10l。见图1。
A 对照品 B 样品
图1 液相色谱图
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Fig.1 HPLC chromatograms
2.2 线性关系
精密称取干燥至恒重的加替沙星对照品30mg，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。精密吸取对照品溶液0.5ml，1ml，2ml，4ml，8ml，16ml置200ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度。按上述色谱条件，取样1ml，过滤，进样10l。以加替沙星峰面积(Y)对加替沙星浓度(X)进行回归，得回归方程Y＝20.5774 X-6.7590，r＝0.9999，加替沙星在7.5～240g•ml-1浓度范围内线性关系良好。
2.3 回收率试验
精密称取高、中、低3种剂量的加替沙星原料，分别加入处方量辅料，按复方加替沙星滴眼液制备方法配制不同浓度的加替沙星溶液，照含量测定项下方法测定，计算回收率，结果见表1。由表1可见本方法回收率良好。
, 百拇医药
表1 加替沙星回收率试验(n=2)
Tab 1 Recovery of gatifloxacin assay (n=2)
浓度加入量(mg/ml)测得量(mg/ml)回收率/%平均回收率/%RSD/%
低
(0.075%)0.7550.755100.099.70.40
0.7500.74899.7
0.7490.751100.3
中
(0.3%)3.0072.99299.5
, http://www.100md.com 3.0003.000100.0
3.0062.98299.2
高
(1.2%)12.00111.88199.0
12.00011.89299.1
12.00112.013100.1
2.4 精密度试验
取回收率试验中高、中、低3种浓度样品溶液，每个浓度连续进样5次，其峰面积测量值的相对标准差(RSD)分别为1.12%，0.41%，1.01%，重复性好。
2.5 稳定性试验
取含量测定项下的供试品溶液10l，分别于0，1，2，4，6，8小时进样，记录色谱图，按外标法计算，峰面积的RSD为0.21%。结果表明，供试品溶液在8小时内稳定。
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2.5 干扰试验
称取空白辅料适量，按样品测定项下的方法制成供试品溶液，进样10l。结果表明空白辅料对测定无干扰。
2.6 样品含量测定
精密吸取复方加替沙星滴眼液1ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度。取1ml用0.45m孔径的针式水系滤膜过滤作为供试品溶液，进样10l，连续平行测定5次，按外标法计算含量，结果见表2。
表2 复方加替沙星滴眼液含量测定结果(n＝5)
Tab 2 Assay result of Compound gatifloxacin eye drop(n＝5)
批号相当标示量/%RSD/%
, 百拇医药
06061599.40.96
06063096.70.49
06070598.80.76
3 讨论
国内文献报道[2-3]的HPLC方法，峰形大多较差，峰形较钝，有杂质峰，或与辅料分离不好。
本研究采用1%三乙胺溶液(磷酸调pH至4.5)-乙腈(86:14)为流动相，能使加替沙星保留时间缩短，峰形较好，而辅料对加替沙星含量的测定无干扰。本实验结果表明，本方法灵敏度高，专属性强。本法测定的线性范围较广，在浓度为7.5～240g•ml-1范围内，浓度和峰面积呈良好的线性关系。回收率试验结果显示本法准确性和重复性均较好，制备出来的溶液8h内均稳定，3批样品含量均在90%～110%规定限度内。与其他HPLC法相比，峰形及药物分离良好，具有快速、简便、可靠的特点，适用于临床加替沙星的药动学研究及滴眼液的质量控制。
, 百拇医药
参考文献
[1]周远大,何海霞,韩敏,等.加替沙星兔眼内组织分布及其药动学研究[J].中国药房,2005,16(6):421-423.
[2]王昌锭,符秀娟,林丽珍.HPLC法测定注射用加替沙星中加替沙星的含量[J].广东药学院学报,2004,20(6):623-624.
[3]李巧,李东,聂中越,等.高效液相色谱法测定加替沙星眼凝胶的含量[J].中国药业,2006,16(2):35-36.
[4]张先洲,陈晓莉,韩世平.RP-HPLC测定加替沙星血药浓度[J].中国药业,2004,7(9):715-716., 百拇医药
摘要 目的 建立测定复方加替沙星滴眼液中加替沙星含量的高效液相色谱法。方法 采用Hypersil ODS C18柱(5m，4.6mm×200mm)为色谱柱，流动相为1%三乙胺溶液(磷酸调pH至4.5)-乙腈(86:14，v/v)，流速为0.9ml•min-1，检测波长325nm，柱温50℃。结果 加替沙星线性范围为7.5～240g•ml-1，r＝0.9999；平均回收率为99.7%，RSD＝0.40%。结论 该方法简便、快速、灵敏，可作为该制剂含量测定的有效方法。
关键词 高效液相色谱法；加替沙星；滴眼液；含量测定
HPLC determination of gatifloxacin in compound gatifloxacin eye drop
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Wang Yandong, Tang Xilan, Ye Chengtian, Wu Wei
(Zhongshan Ophthalmic center of Sun Yat-sen university, guangzhou 510060)
ABSTRACT OBJECTIVE To establish an HPLC method for the determination of gatifloxacin in compound gatifloxacin eye drop. METHODS The analytical column was Hypersil ODS C18 (5m，4.6mm×200mm), the mobile phas was composed of 1% triethylamine solution and acetonitrile(86/14,V/V) with the flow rate of 0.9ml/min, the detection wavelength was 325nm and column temperature was 50℃.RESULTS The calibration curve was linear within the concentration range of 7.5～240 g•ml-1，r＝0.9999.The average recovery of gatifloxacin was 99.7%,(RSD=0.40%). CONCLUSION The method is simple,rapid and accurate.It is suitable for the determination of the content of gatifloxacin in compound gatifloxacin eye drop.
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KEY WORDS HPLC;gatifloxacin;eye drop;content determination
加替沙星(Gatifloxacin, GTFX)属第4代氟喹诺酮类合成抗菌药，其8位甲氧基的引入，使之比以往同类药物对革兰阳性菌的抗菌作用更强。它不仅弥补了环丙沙星、氧氟沙星等第3代氟喹诺酮类药物对G-菌、G+菌、厌氧菌、支原体、衣原体及分枝杆菌等活性较弱的缺点，对这些病原体均具有较好的抗菌作用，而且几乎没有潜在的光敏副作用[1-2]。目前临床上常用剂型多为注射液和口服制剂，为拓宽其使用范围，本院制剂室制备了复方加替沙星滴眼液。为了加强质量控制，我们通过反相高效液相色谱法(HPLC)建立了复方加替沙星滴眼液中加替沙星的含量测定方法。
1 仪器与试药
1.1 药品与试剂
加替沙星对照品(批号：060608，99.2%)由宣城精方医药化工有限公司提供，复方加替沙星滴眼液由中山大学附属眼科医院制剂室提供，乙腈为色谱纯，三乙胺和磷酸为分析纯。
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1.2 仪器
Agilent 1100高效液相色谱仪：包括G1314A紫外检测器，G1316A柱温箱，G1329A带温控自动进样器，G1311A四元泵，G1322A真空脱气机(美国安杰伦公司)；Agilent 1100化学工作站。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS C18(5m，4.6mm×200mm)；流动相为1%三乙胺溶液(磷酸调pH至4.5)-乙腈(86:14，v/v)，流速为0.9ml•min-1，检测波长325nm，柱温50℃，进样量10l。见图1。
A 对照品 B 样品
图1 液相色谱图
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Fig.1 HPLC chromatograms
2.2 线性关系
精密称取干燥至恒重的加替沙星对照品30mg，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。精密吸取对照品溶液0.5ml，1ml，2ml，4ml，8ml，16ml置200ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度。按上述色谱条件，取样1ml，过滤，进样10l。以加替沙星峰面积(Y)对加替沙星浓度(X)进行回归，得回归方程Y＝20.5774 X-6.7590，r＝0.9999，加替沙星在7.5～240g•ml-1浓度范围内线性关系良好。
2.3 回收率试验
精密称取高、中、低3种剂量的加替沙星原料，分别加入处方量辅料，按复方加替沙星滴眼液制备方法配制不同浓度的加替沙星溶液，照含量测定项下方法测定，计算回收率，结果见表1。由表1可见本方法回收率良好。
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表1 加替沙星回收率试验(n=2)
Tab 1 Recovery of gatifloxacin assay (n=2)
浓度加入量(mg/ml)测得量(mg/ml)回收率/%平均回收率/%RSD/%
低
(0.075%)0.7550.755100.099.70.40
0.7500.74899.7
0.7490.751100.3
中
(0.3%)3.0072.99299.5
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3.0062.98299.2
高
(1.2%)12.00111.88199.0
12.00011.89299.1
12.00112.013100.1
2.4 精密度试验
取回收率试验中高、中、低3种浓度样品溶液，每个浓度连续进样5次，其峰面积测量值的相对标准差(RSD)分别为1.12%，0.41%，1.01%，重复性好。
2.5 稳定性试验
取含量测定项下的供试品溶液10l，分别于0，1，2，4，6，8小时进样，记录色谱图，按外标法计算，峰面积的RSD为0.21%。结果表明，供试品溶液在8小时内稳定。
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2.5 干扰试验
称取空白辅料适量，按样品测定项下的方法制成供试品溶液，进样10l。结果表明空白辅料对测定无干扰。
2.6 样品含量测定
精密吸取复方加替沙星滴眼液1ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度。取1ml用0.45m孔径的针式水系滤膜过滤作为供试品溶液，进样10l，连续平行测定5次，按外标法计算含量，结果见表2。
表2 复方加替沙星滴眼液含量测定结果(n＝5)
Tab 2 Assay result of Compound gatifloxacin eye drop(n＝5)
批号相当标示量/%RSD/%
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06061599.40.96
06063096.70.49
06070598.80.76
3 讨论
国内文献报道[2-3]的HPLC方法，峰形大多较差，峰形较钝，有杂质峰，或与辅料分离不好。
本研究采用1%三乙胺溶液(磷酸调pH至4.5)-乙腈(86:14)为流动相，能使加替沙星保留时间缩短，峰形较好，而辅料对加替沙星含量的测定无干扰。本实验结果表明，本方法灵敏度高，专属性强。本法测定的线性范围较广，在浓度为7.5～240g•ml-1范围内，浓度和峰面积呈良好的线性关系。回收率试验结果显示本法准确性和重复性均较好，制备出来的溶液8h内均稳定，3批样品含量均在90%～110%规定限度内。与其他HPLC法相比，峰形及药物分离良好，具有快速、简便、可靠的特点，适用于临床加替沙星的药动学研究及滴眼液的质量控制。
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参考文献
[1]周远大,何海霞,韩敏,等.加替沙星兔眼内组织分布及其药动学研究[J].中国药房,2005,16(6):421-423.
[2]王昌锭,符秀娟,林丽珍.HPLC法测定注射用加替沙星中加替沙星的含量[J].广东药学院学报,2004,20(6):623-624.
[3]李巧,李东,聂中越,等.高效液相色谱法测定加替沙星眼凝胶的含量[J].中国药业,2006,16(2):35-36.
[4]张先洲,陈晓莉,韩世平.RP-HPLC测定加替沙星血药浓度[J].中国药业,2004,7(9):715-716., 百拇医药