摘要 目的:构建人血管抑素K1-3的重组酵母胞内表达质粒PHIL-D2/K1-3，获得重组目的蛋白。方法:从胎儿肝脏组织用RT-PCR方法扩增人血管抑素K1-3目的基因，克隆至酵母胞内表达质粒PHIL-D2中，线性化后转化到毕赤酵母GS115胞内，经PCR和Sourthern杂交筛选出阳性转化子，并用甲醇诱导表达。表达产物进行SDS-PAGE(12%)和Western blot检测，经赖氨酸亲和层析柱纯化后，用Lowry法测定蛋白含量，并进行生物活性测定。结果:SDS-PAGE和Western blot结果显示，表达蛋白质的相对分子量为30kd左右，低糖基化。Lowry法测定蛋白表达量为6.8mg/L。活性测定实验表明重组血管抑素能特异抑制人血管内皮细胞的增殖。结论:在毕赤酵母GS115胞内成功表达了人血管抑素K1-3重组蛋白。

    关键词 人血管抑素K1-3; PHIL-D2 ; 毕赤酵母GS115 ; 表达

    A Study on Intracellular Expresstion of Human Angiostatin K1-3 in Pichia Pastoris

    ZHANG Lifang，HU Xianxian， YU Hongtao，Lu Jun，Wang Huiqing

    (Baotou Medical College， Baotou 014010，China)

    AbstractObjective:To construct a recombinant plasmid PHIL-D2/K1-3 for the expression of human AngiostatinK1-3 in Pichia pastoris.Methods :The gene of human AngiostatinK1-3 was amplified from the embryo liver tissue using RT-PCR and then cloned into PHIL-D2 vector .After being linearized ......