人禽流感实验室诊断需注意的问题
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根据可导致鸟类或禽类疾病的严重程度和病毒的遗传学特征可将禽流感病毒分为低致病性和高致病性两种。大多数禽流感病毒仅导致鸟类或禽类的轻微感染或无症状感染,但高致病性禽流感可产生急性致死性的感染。
目前认为,通过接触感染H5N1型高致病性禽流感病毒的鸟类或禽类粪便或分泌物是人感染禽流感的主要途径。人禽流感的最初症状包括发热、咳嗽和其他呼吸系统症状。还可出现一些其他的流感样症状和腹泻。潜伏期通常2~8天,也可长达17天。感染的患者会出现一些严重的并发症,如急性呼吸窘迫综合症、多器官功能衰竭以及脓毒症等,死亡率高达55%~60%。
已知甲型禽流感病毒有16个血凝素(HA)亚型和9个神经氨酸酶(NA)亚型,HA蛋白和NA蛋白可产生多种组合,每种组合都会产生不同的亚型。在鸟体内可发现多种HA亚型,最常见的是H5、H7和H9 3种。
实验室检查是诊断人感染H5N1型高致病性禽流感的主要手段,加拿大Majury等总结报告了在人禽流感实验室诊断中须注意的问题。
标本收集
收集患者标本时必须采取标准和恰当的防护措施。应在出现症状后(1~3天内)尽快采集。一般情况下,鼻、咽拭子或吸取物作为季节性流感的检测,但口咽及下呼吸道标本更适合于人感染H5N1型禽流感的检测,多位点取材可使检查结果更可靠。
对不典型病例,如以胃肠道症状和脑病为主要表现者,建议检测粪便和脑脊液。检测禽流感取材的拭子必须是带有铝制或塑料柄的尼龙棉签,用于细菌学检测的拭子和取材工具不适合,含钙盐的或木柄棉签也不宜用来取标本。
标本储存与运输
标本必须收集于适当的病毒运输媒介中,按照危险物品运输条例规定立即送至检测实验室。标本可在4℃保存48~72小时,检测之后,应于-70℃冻存。
标本检测
目前不推荐快速抗原检测法,因为阴性结果不能排除人感染禽流感,而阳性结果(包括免疫荧光法)不能区分普通季节性流感和甲型禽流感。
确证和分型须利用分子生物学方法(如逆转录酶聚合酶链反应)和(或)病毒培养。这种高危险性病原微生物的培养必须在达到生物安全三级的实验室进行。所有甲型H5N1禽流感阳性标本都必须由国家微生物学实验室或指定的实验室确认。
[李文刚摘译自CMAJ 2006,175(11): 1371], 百拇医药