聚和酶链反应操作体会
聚和酶链反应;生物学;DNA,,],聚和酶链反应;生物学;DNA,1PCR原理,2临床标本的处理与模板制备及保存,参考文献:
[关键词] 聚和酶链反应;生物学;DNA聚和酶链反应(polymerase chain reaction PCR)又称体外基因扩增技术,是20世纪80年代中期发展起来的一种新的分子生物学技术[1]。由于当时缺乏耐热的DNA多聚酶,在每一循环的DNA模板变性后,又需添加一次DNA多聚酶因而操作复杂易出错。至1989年纯化了耐热的TaqDNA多聚酶后PCR才应用到生物领域,随后广泛应用到基础医学、临床医学、临床诊断等领域,如进行DNA测序、遗传性疾病分析和诊断、各种传染性疾病的诊断。
1 PCR原理
PCR实质就是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法。其原理首先将待扩增DNA双链热作用下氢键断裂成为单链DNA,这一过程称之为“变性”。变性后特异性的引物分别与两条DNA的单链互补配对形成双链,即复性。此时两引物3'端相对,5'端相背,最后在一定温度条件下,在TaqDNA聚合酶催化作用下引物从5'端至3'端延伸,按照碱基互补原则延伸成为两条双链。这种变性——复性——延伸过程的重复就是一个PCR循环 ......
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