白术内酯Ⅰ及白术内酯Ⅲ对唾液淀粉酶活性的影响
摘要：目的通过研究白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ对唾液淀粉酶活性的影响来探讨白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ是否是白术健脾的有效成分。方法采用红色染色淀粉法测定白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ对酶活性的影响。结果白术内酯Ⅰ具有增强淀粉酶活性的作用。结论 白术内酯Ⅰ可以作为白术健脾运脾的有效成分之一。
关键词：白术内酯Ⅰ； 白术内酯Ⅲ； 脾虚； 唾液淀粉酶活性
Effect of AtractylodeⅠ,Ⅲ on Saliva Amylase Activity in Rats of Diarrhea and Spleen Deficiency
HAO Yanjun， SANG Yuli， LI Baoning, WANG Le， JIA Tianzhu
(College of TCM of Liaoning, Shengyang 110032, China)
Abstract：ObjectiveTo observe the effect of atractylodeⅠ,Ⅲ on saliva amylase activity and study the active components of reinforcing the spleen in Atractylodes macrocephala Koidz.MethodsRed dyed amylopectin method. ResultsAtractylodeⅠ increased the activity of saliva amylae. ConclusionAtractylenolideⅠmay be one of the active components to improve spleen.
Key words:AtractylodeⅠ; AtractylodeⅢ; Spleen deficiency; Saliva amylase activity
白术为菊科苍术属Atractylodes macrocephala Koidz.多年生草本植物白术的根茎。为常用中药。具有补气健脾、燥湿利水、止汗、安胎的功效。临床多用于脾虚证，生用或炮制应用。传统的中医理论认为：白术生用燥湿健脾，偏于燥湿作用。麸炒后健脾燥湿，偏于健脾。但目前白术中哪些化学成分是燥性成分和哪些是健脾成分至今不清楚。现代研究已经证实白术麸炒后苍术酮的含量降低而白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ增加。由此我们提出假说：白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ是白术的健脾成分。本实验研究了白术内酯Ⅰ、Ⅲ对唾液淀粉酶活性的影响，从而验证此假说。
1 器材
1.1 仪器7230G型分光光度计(上海分析仪器总厂)；恒温水浴锅(余姚金电仪表有限公司)。
1.2 主要药品和试剂(磷酸二氢钠(汕头市化学试剂厂批号980603)，磷酸氢二钠(汕头市化学试剂厂批号980613)，磷酸二氢钾(汕头市化学试剂厂批号971112)，二甲基亚砜 (国药集团化学试剂有限公司批号T20041102)，可溶性淀粉(国药集团化学试剂有限公司批号T20031205)。白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ(实验室自制，纯度>98%)。1/15 mol/LPBS缓冲液(pH=8.0)，0.1mol/L碘储备液，2%二甲基亚砜的PBS缓冲液。基质缓冲液：称取氯化钠4.5g、Na2HPO4·12H2O 28.47 g和K2H2PO4 6.25 g，溶于250 ml蒸馏水中，加热至沸。白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ溶液：精密称取白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ，加1%二甲基亚砜的PBS缓冲液于容量瓶中，制成所需浓度的溶液。唾液淀粉酶溶液：取清晨唾液,离心,吸取上清液1 ml,加蒸馏水稀释至所需倍数[1]。
2 方法
2.1 实验组正常对照组为未加白术内酯的唾液组，实验组分别为加入了低、高浓度白术内酯Ⅰ和低高浓度白术内酯Ⅱ的唾液，每组5份样品。
2.2 操作方法取配好的基质0.5 ml，加入唾液1 ml，再加入配好的不同浓度的白术内酯溶液0.5 ml，最后再加入0.1 mol/L碘储备液1 ml，如表1所示。
表1 测定过程中加入物用量(略)
加入物用量见表1。混匀，37℃水浴水解7.5 min后,加水定容至10 ml，660 nm下测定A值，根据u=AB-Au/AB ×0.4×15/7.5×6 250公式,求u值,进行比较。
3 结果
见表2。
表2 白术内酯对唾液淀粉酶活性的影响(略)
与正常对照组比较，△ P<0.05
4 讨论
传统的中医理论认为：白术生用燥湿健脾，偏于燥湿作用。麸炒后健脾燥湿，偏于健脾。现在研究表明，白术麸炒后白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ的含量增加[2，3]。中医有“脾主涎”“涎为脾液”的论述，本文采用酶学方法，测定了白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ对唾液淀粉酶活性的影响，实验表明，与正常组比较白术内酯Ⅰ对唾液淀粉酶活性有增强作用(P<0.05)。而白术内酯Ⅲ与正常组无明显差别。结果提示，白术内酯Ⅰ可以作为白术健脾运脾的效应成分之一，为研究白术的健脾活性部位和活性成分提供了药理学的验证，同时为阐明白术的炮制原理提供理论依据。
参考文献：
[1] 广州中医学院脾胃研究组.脾虚患者唾液淀粉酶活性初步研究 [J].中华医学杂志，1980，60(5)∶290.
[2] 文红梅，张爱华，王 莉，等.炮制对白术中白术内酯Ⅰ含量的影响[J].中药材 ，1999,22(3)：125.
[3] 文红梅，李 伟，吴 皓，等 炮制对白术中白术内酯Ⅲ含量的影响[J].中国中药杂志 ，1997，22(11)：662.
基金项目：国家“十五”攻关课题(No.2001BA701A11)
(辽宁中医学院，辽宁 沈阳 110032), 百拇医药(郝延军， 桑育黎， 李宝林， 王勒， 贾天柱)
关键词：白术内酯Ⅰ； 白术内酯Ⅲ； 脾虚； 唾液淀粉酶活性
Effect of AtractylodeⅠ,Ⅲ on Saliva Amylase Activity in Rats of Diarrhea and Spleen Deficiency
HAO Yanjun， SANG Yuli， LI Baoning, WANG Le， JIA Tianzhu
(College of TCM of Liaoning, Shengyang 110032, China)
Abstract：ObjectiveTo observe the effect of atractylodeⅠ,Ⅲ on saliva amylase activity and study the active components of reinforcing the spleen in Atractylodes macrocephala Koidz.MethodsRed dyed amylopectin method. ResultsAtractylodeⅠ increased the activity of saliva amylae. ConclusionAtractylenolideⅠmay be one of the active components to improve spleen.
Key words:AtractylodeⅠ; AtractylodeⅢ; Spleen deficiency; Saliva amylase activity
白术为菊科苍术属Atractylodes macrocephala Koidz.多年生草本植物白术的根茎。为常用中药。具有补气健脾、燥湿利水、止汗、安胎的功效。临床多用于脾虚证，生用或炮制应用。传统的中医理论认为：白术生用燥湿健脾，偏于燥湿作用。麸炒后健脾燥湿，偏于健脾。但目前白术中哪些化学成分是燥性成分和哪些是健脾成分至今不清楚。现代研究已经证实白术麸炒后苍术酮的含量降低而白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ增加。由此我们提出假说：白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ是白术的健脾成分。本实验研究了白术内酯Ⅰ、Ⅲ对唾液淀粉酶活性的影响，从而验证此假说。
1 器材
1.1 仪器7230G型分光光度计(上海分析仪器总厂)；恒温水浴锅(余姚金电仪表有限公司)。
1.2 主要药品和试剂(磷酸二氢钠(汕头市化学试剂厂批号980603)，磷酸氢二钠(汕头市化学试剂厂批号980613)，磷酸二氢钾(汕头市化学试剂厂批号971112)，二甲基亚砜 (国药集团化学试剂有限公司批号T20041102)，可溶性淀粉(国药集团化学试剂有限公司批号T20031205)。白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ(实验室自制，纯度>98%)。1/15 mol/LPBS缓冲液(pH=8.0)，0.1mol/L碘储备液，2%二甲基亚砜的PBS缓冲液。基质缓冲液：称取氯化钠4.5g、Na2HPO4·12H2O 28.47 g和K2H2PO4 6.25 g，溶于250 ml蒸馏水中，加热至沸。白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ溶液：精密称取白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ，加1%二甲基亚砜的PBS缓冲液于容量瓶中，制成所需浓度的溶液。唾液淀粉酶溶液：取清晨唾液,离心,吸取上清液1 ml,加蒸馏水稀释至所需倍数[1]。
2 方法
2.1 实验组正常对照组为未加白术内酯的唾液组，实验组分别为加入了低、高浓度白术内酯Ⅰ和低高浓度白术内酯Ⅱ的唾液，每组5份样品。
2.2 操作方法取配好的基质0.5 ml，加入唾液1 ml，再加入配好的不同浓度的白术内酯溶液0.5 ml，最后再加入0.1 mol/L碘储备液1 ml，如表1所示。
表1 测定过程中加入物用量(略)
加入物用量见表1。混匀，37℃水浴水解7.5 min后,加水定容至10 ml，660 nm下测定A值，根据u=AB-Au/AB ×0.4×15/7.5×6 250公式,求u值,进行比较。
3 结果
见表2。
表2 白术内酯对唾液淀粉酶活性的影响(略)
与正常对照组比较，△ P<0.05
4 讨论
传统的中医理论认为：白术生用燥湿健脾，偏于燥湿作用。麸炒后健脾燥湿，偏于健脾。现在研究表明，白术麸炒后白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ的含量增加[2，3]。中医有“脾主涎”“涎为脾液”的论述，本文采用酶学方法，测定了白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ对唾液淀粉酶活性的影响，实验表明，与正常组比较白术内酯Ⅰ对唾液淀粉酶活性有增强作用(P<0.05)。而白术内酯Ⅲ与正常组无明显差别。结果提示，白术内酯Ⅰ可以作为白术健脾运脾的效应成分之一，为研究白术的健脾活性部位和活性成分提供了药理学的验证，同时为阐明白术的炮制原理提供理论依据。
参考文献：
[1] 广州中医学院脾胃研究组.脾虚患者唾液淀粉酶活性初步研究 [J].中华医学杂志，1980，60(5)∶290.
[2] 文红梅，张爱华，王 莉，等.炮制对白术中白术内酯Ⅰ含量的影响[J].中药材 ，1999,22(3)：125.
[3] 文红梅，李 伟，吴 皓，等 炮制对白术中白术内酯Ⅲ含量的影响[J].中国中药杂志 ，1997，22(11)：662.
基金项目：国家“十五”攻关课题(No.2001BA701A11)
(辽宁中医学院，辽宁 沈阳 110032), 百拇医药(郝延军， 桑育黎， 李宝林， 王勒， 贾天柱)