不同采收期新疆皱叶酸模中蒽醌含量的研究
摘要：目的研究不同采收期皱叶酸模中蒽醌含量。方法用紫外光可见分光光度法测定游离蒽醌含量。结果11月份采集皱叶酸模根中总蒽醌含量高于其它月份。结论采集皱叶酸模最佳时期是11月份。
关键词：皱叶酸模； 蒽醌； 分光光度法
Determination of Anthraquinone in Rheum crispus L.Collected from Different Seasons
LI Fang, ZHAO Wenbin
(Shihezi Peoples Hospital,Xinjiang Shihezi,832000,China,Key Laboratory of Phytomedicine Resources ＆ Modernization of TCM,Xingjiang Shihezi,832000,China)
Abstract:ObjectiveTo study the content of anthraquinone in Rheum crispus L.collected from different seasons.MethodsUVvisible spectrometry was employed to study the total content of free anthraquinone.ResultsThe content of total anthraquinone in Rheum crispus L.collected in November was the highest.ConclusionThe results show that the optimum collected time of Rheum crispus L.is November in Shihezi.
Key words:Rheum crispus L.; Anthraquinone; Spectrometry
皱叶酸模Rumex crispus L.系蓼科(Polyonaceae)酸模属植物，其根供药用，全草及叶亦入药。该植物在新疆广泛分布，多生于河流、湖泊沿岸及水溪旁。通过民间多年临床实践，证明该植物的根对上呼吸道感染性疾病，下焦湿热所致的肾病、淋病有确切疗效，其性味苦寒，具清热止血，泻火通便、解毒、活血祛淤、健胃，主用于肠道积滞、大便秘结、热毒等症，皱叶酸模还有明显的降血脂作用[1]。其中蒽醌类成分是重要的活性成分之一。笔者利用蒽醌在碱溶液中生成红色的反应，总蒽醌一般以1，8二羟基蒽醌为参考标准，用比色法来测定[2]，对新疆皱叶酸模根中的蒽醌类成分进行了含量测定研究[3]。
1 器材
1.1 材料实验用野生皱叶酸模根，分别在4，5，7，9，11月采集，原植物经石河子大学药学院刘金荣教授鉴定为皱叶酸模Rumex crispus L.。取其根茎，洗净晾干，切割粉碎过65目筛，烘干备用。
1.2 试剂大黄酚(chrysophanol)、大黄素、大黄素甲醚、1，8二羟基蒽醌标准品，购自中国药品生物制品鉴定所，实验所用乙醚、氢氧化钠、硫酸、氯仿等试剂均为分析纯。
1.3 仪器DL 700 超声波仪(450 kHz±5%)；721分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)；SHB3循环真空泵(上海早生科技有限公司)；802T台式高速离心机(江苏省金坛市医疗设备厂)。
2 方法与结果
2.1 标准曲线的绘制精密称取1，8二羟基蒽醌对照品3.0 mg，加入乙醚溶解于25 ml容量瓶中并稀释至刻度。分别吸取上述溶液1，2，3，4，5 ml于25 ml容量瓶中，挥尽乙醚，加5%NaOH2%NH4OH混合碱液溶解并稀释至刻度，摇匀。以混合碱液为空白对照，用721型分光光度计于510 nm处测定吸光度，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图，结果浓度在5.28~26.40 μg·ml-1范围与吸光度成良好的线性关系。回归方程为Y=43.457X0.005 7，r=0.999 6。结果见表1。
2.2 游离蒽醌含量的测定分别精密称定4，5，7，9，11月份皱叶酸模根茎粉末2 g，分别用氯仿50，30，20 ml水浴回流提取3，2，1 h。合并滤液于100 ml容量瓶中，补足损失氯仿，定容至刻度。吸取50.0 ml于分液漏斗中，用蒸馏水20 ml洗涤数次，至水层无色，弃去水液。氯仿层用混合碱液振摇萃取数次，至混合碱液无色，合并碱液，移入100 ml容量瓶中，用混合碱液定容。精密吸取上述溶液50 ml至100 ml容量瓶中，用混合碱液定容，于离心机上离心15 min，转速为3 000r/m。吸取离心液5 ml于25 ml容量瓶中用混合碱液定容，放置1 h，以混合碱液为空白，在510 nm处测定吸光度。按下式计算皱叶酸模游离蒽醌的含量：游离蒽醌含量(%)=2CD/W×100%因为从100 ml氯仿吸取50 ml进行含量测定，C为供试液游离蒽醌浓度(μg/ml)，D为供试品溶液的稀释因素，W为供试品重量(μg)计算含量。结果见表2。
表1 线性关系实验结果(略)
图1 标准曲线(略)
2.3 总蒽醌的含量测定先用2.5 mol/L H2SO4水解，然后加氯仿提取，再加混合碱液多次萃取制得样溶液，分别于520 nm处测定，计算含量。结果见表2。总蒽醌含量(%)=CD/W×100%
2.4 回收率实验采用加样回收率法，精密称取皱叶酸模样品粉末，分别加入已知含量的1，8二羟基蒽醌对照品溶液，回流提取，计算含量。回收率为104.7%(n=6)。重复性实验系精密称取皱叶酸模粉末6份，按样品含量测定项的操作，测得RSD=3.96%(n=6)。
表2 皱叶酸模根中蒽醌的含量(略)
3 讨论
3.1 将提取物同标准品大黄素、大黄酚及大黄素甲醚进行硅胶TLC定性比较，结果表明这些蒽琨类成分均存在于新疆皱叶酸模中，据文献道，这些蒽醌类成分都有一定的生理活性[4]。皱叶酸根中的蒽醌有的以苷的形式存在于植物中，故在测定总蒽醌时先水解后再进行测定。
3.2 在总蒽醌的含量测定中，萃取后的样品混合碱液在0.5~8 h内稳定，以后红色逐渐减退。
3.3 酸模为多年生草植物，四月下旬开始展叶，5月中旬到8月份为生长旺盛期，8~9月份为花期，10月底到11月份部分叶片开始脱落，12月落完，其蒽醌含量的高低依次为11月>9月>7月>5月>4月。
参考文献：
[1] 张永红.大黄中蒽醌类成分提取条件和选择[J].西北药学杂志,1997,12(2):59.
[2] 郑占虎,董泽平,佘靖.中药现代研究与应用[M].北京:科学技术出版社,1997：388.
[3] 严子炎,吴志明,何明三,等.一捻金中大黄总蒽醌分光光度法含量测定研究[J].湖北中医学院学报,1999,17(1):23.
[4] 周健.一种从植物中提取、分离蒽醌类化合物的方法[M].ZTC中药现代化分离与制技术，2003：11.
(新疆石河子人民医院 832000；新疆兵团植物资源与中药现代化重点实验室 832000), http://www.100md.com(李芳， 赵文彬)
关键词：皱叶酸模； 蒽醌； 分光光度法
Determination of Anthraquinone in Rheum crispus L.Collected from Different Seasons
LI Fang, ZHAO Wenbin
(Shihezi Peoples Hospital,Xinjiang Shihezi,832000,China,Key Laboratory of Phytomedicine Resources ＆ Modernization of TCM,Xingjiang Shihezi,832000,China)
Abstract:ObjectiveTo study the content of anthraquinone in Rheum crispus L.collected from different seasons.MethodsUVvisible spectrometry was employed to study the total content of free anthraquinone.ResultsThe content of total anthraquinone in Rheum crispus L.collected in November was the highest.ConclusionThe results show that the optimum collected time of Rheum crispus L.is November in Shihezi.
Key words:Rheum crispus L.; Anthraquinone; Spectrometry
皱叶酸模Rumex crispus L.系蓼科(Polyonaceae)酸模属植物，其根供药用，全草及叶亦入药。该植物在新疆广泛分布，多生于河流、湖泊沿岸及水溪旁。通过民间多年临床实践，证明该植物的根对上呼吸道感染性疾病，下焦湿热所致的肾病、淋病有确切疗效，其性味苦寒，具清热止血，泻火通便、解毒、活血祛淤、健胃，主用于肠道积滞、大便秘结、热毒等症，皱叶酸模还有明显的降血脂作用[1]。其中蒽醌类成分是重要的活性成分之一。笔者利用蒽醌在碱溶液中生成红色的反应，总蒽醌一般以1，8二羟基蒽醌为参考标准，用比色法来测定[2]，对新疆皱叶酸模根中的蒽醌类成分进行了含量测定研究[3]。
1 器材
1.1 材料实验用野生皱叶酸模根，分别在4，5，7，9，11月采集，原植物经石河子大学药学院刘金荣教授鉴定为皱叶酸模Rumex crispus L.。取其根茎，洗净晾干，切割粉碎过65目筛，烘干备用。
1.2 试剂大黄酚(chrysophanol)、大黄素、大黄素甲醚、1，8二羟基蒽醌标准品，购自中国药品生物制品鉴定所，实验所用乙醚、氢氧化钠、硫酸、氯仿等试剂均为分析纯。
1.3 仪器DL 700 超声波仪(450 kHz±5%)；721分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)；SHB3循环真空泵(上海早生科技有限公司)；802T台式高速离心机(江苏省金坛市医疗设备厂)。
2 方法与结果
2.1 标准曲线的绘制精密称取1，8二羟基蒽醌对照品3.0 mg，加入乙醚溶解于25 ml容量瓶中并稀释至刻度。分别吸取上述溶液1，2，3，4，5 ml于25 ml容量瓶中，挥尽乙醚，加5%NaOH2%NH4OH混合碱液溶解并稀释至刻度，摇匀。以混合碱液为空白对照，用721型分光光度计于510 nm处测定吸光度，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图，结果浓度在5.28~26.40 μg·ml-1范围与吸光度成良好的线性关系。回归方程为Y=43.457X0.005 7，r=0.999 6。结果见表1。
2.2 游离蒽醌含量的测定分别精密称定4，5，7，9，11月份皱叶酸模根茎粉末2 g，分别用氯仿50，30，20 ml水浴回流提取3，2，1 h。合并滤液于100 ml容量瓶中，补足损失氯仿，定容至刻度。吸取50.0 ml于分液漏斗中，用蒸馏水20 ml洗涤数次，至水层无色，弃去水液。氯仿层用混合碱液振摇萃取数次，至混合碱液无色，合并碱液，移入100 ml容量瓶中，用混合碱液定容。精密吸取上述溶液50 ml至100 ml容量瓶中，用混合碱液定容，于离心机上离心15 min，转速为3 000r/m。吸取离心液5 ml于25 ml容量瓶中用混合碱液定容，放置1 h，以混合碱液为空白，在510 nm处测定吸光度。按下式计算皱叶酸模游离蒽醌的含量：游离蒽醌含量(%)=2CD/W×100%因为从100 ml氯仿吸取50 ml进行含量测定，C为供试液游离蒽醌浓度(μg/ml)，D为供试品溶液的稀释因素，W为供试品重量(μg)计算含量。结果见表2。
表1 线性关系实验结果(略)
图1 标准曲线(略)
2.3 总蒽醌的含量测定先用2.5 mol/L H2SO4水解，然后加氯仿提取，再加混合碱液多次萃取制得样溶液，分别于520 nm处测定，计算含量。结果见表2。总蒽醌含量(%)=CD/W×100%
2.4 回收率实验采用加样回收率法，精密称取皱叶酸模样品粉末，分别加入已知含量的1，8二羟基蒽醌对照品溶液，回流提取，计算含量。回收率为104.7%(n=6)。重复性实验系精密称取皱叶酸模粉末6份，按样品含量测定项的操作，测得RSD=3.96%(n=6)。
表2 皱叶酸模根中蒽醌的含量(略)
3 讨论
3.1 将提取物同标准品大黄素、大黄酚及大黄素甲醚进行硅胶TLC定性比较，结果表明这些蒽琨类成分均存在于新疆皱叶酸模中，据文献道，这些蒽醌类成分都有一定的生理活性[4]。皱叶酸根中的蒽醌有的以苷的形式存在于植物中，故在测定总蒽醌时先水解后再进行测定。
3.2 在总蒽醌的含量测定中，萃取后的样品混合碱液在0.5~8 h内稳定，以后红色逐渐减退。
3.3 酸模为多年生草植物，四月下旬开始展叶，5月中旬到8月份为生长旺盛期，8~9月份为花期，10月底到11月份部分叶片开始脱落，12月落完，其蒽醌含量的高低依次为11月>9月>7月>5月>4月。
参考文献：
[1] 张永红.大黄中蒽醌类成分提取条件和选择[J].西北药学杂志,1997,12(2):59.
[2] 郑占虎,董泽平,佘靖.中药现代研究与应用[M].北京:科学技术出版社,1997：388.
[3] 严子炎,吴志明,何明三,等.一捻金中大黄总蒽醌分光光度法含量测定研究[J].湖北中医学院学报,1999,17(1):23.
[4] 周健.一种从植物中提取、分离蒽醌类化合物的方法[M].ZTC中药现代化分离与制技术，2003：11.
(新疆石河子人民医院 832000；新疆兵团植物资源与中药现代化重点实验室 832000), http://www.100md.com(李芳， 赵文彬)