13种伞形科中药抗氧化能力研究
摘要：目的对13种伞形科中药的抗超氧阴离子(O2)能力进行了研究。 方法采用黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶-鲁米诺化学发光体系测定了中药乙醇提取物对O2自由基的清除作用。 结果羌活对超氧自由基清除能力最强。结论13种伞形科中药对超氧自由基均有清除作用。提取液的加入量与抑制O2自由基的能力呈现明显量效关系。
关键词：超氧自由基； 抗氧化； 伞形科； 化学发光法
Study on Antioxidation of Umbelliferae Chinese Herbs
PAN Haiyu， HAN Gang， JIANG Hui， WANG Chuanmei
(Pharmaceutical Department,North China Coal Medical College,Tangshan Key Laboratory of Drug Research, Tangshan 063000,China)
Abstract：ObjectiveThe ability of antioxidation for 13 kinds of Umbelliferae has been studied.MethodsThe antioxidant activitise of the ethanol extractions of 13 Umbelliferac Chinese herb medicine were measured by chemiluminescence. ResultsThe ability that scavenges superoxide radical(O2)was Notopterygium forbesii Boiss. Conclusion13 kinds of Unbelliferae Chinese herb medicines can scavenge superoxide radical.
Key words：Superoxide free radical; Antioxidation; Umbelliferae; Chemiluminescence
随着自由基医学的发展，人们认识到多种疾病与自由基有关。机体在代谢过程中产生超氧阴离子自由基，过量的超氧阴离子自由基如不及时清除，在体内积累会产生细胞毒性[1]，破坏生物膜的结构和功能，引发多种疾病。寻找抗自由基活性成分的研究非常活跃[2]。我国植物资源非常丰富，许多中药有抗自由基作用[3]。我国约有伞形科植物95属，600种，已知药用的有230种[4]。伞形科植物常含挥发油、香豆素、三萜及黄酮类化合物。自古以来伞形科植物多用于活血，美白等方剂中。本研究对13种常用伞形科中药的乙醇提取液进行了抗超氧自由基能力的研究，为筛选抗衰老药物奠定基础。
1 仪器与材料
1.1 仪器FA4000电子天平(上海精科天平厂)，WDD2型发光仪(北京瑞利分析仪器厂)，KDC1042离心机(科大创新公司)，电热恒温水浴锅(上海医疗器械厂)，PHS3C型酸度计(上海大华仪器厂)。
1.2 试剂鲁米诺，黄嘌呤，黄嘌呤氧化酶购自Sigma公司，Vc购自北京双旋微生物培养基制品厂，其余试剂均为分析纯。
1.3 中药材 羌活Notopterygium forbesii boiss，川芎Ligusticum chuangxiong Hort，柴胡Bupleurum falcatum L.， 独活Angclica pubescens maxim.，蛇床子Cnidium monnieri(Li) Cusson，小茴香Foeniculum Vulgare Mill.，当归Angelica Sinensis diels，北沙参Glehnia Littoralis FR.，白芷Angelica Dahurica benth. Hook，藁本Ligusticum sinense Duver，白花前胡Peucedanum praeruptorum Dunn，防风Saposhnikovia divaricata，川党参Codonopsis tangshen Oliv[5]以上中药材均购自河北安国中药材市场，经药学系生药教研室鉴定，符合2000版药典标准。
2 方法与结果
2.1 中药提取液的制备 取中药材适量，粉碎，干燥器中干燥1 d，过40目筛。准确称取10 g中药粉末，于回流装置中，加入95%乙醇50 ml，电热套加热，两次回流提取；第1次回流2 h，第2次回流时乙醇用量与加热时间均减半。合并两次提取液，3 000 r·min1离心5 min，取上清液于100 ml容量瓶中定容，作为样品测试液。另取Vc配成5 mmol·L1作为对照液备用。
2.2 清除超氧自由基作用采用黄嘌呤黄嘌呤氧化酶鲁米诺产生O2自由基的发光体系进行测定[6]。在发光杯中依次加入pH=9.40，1 mol·L1Na2CO3NaHCO3缓冲溶液0.80 ml,1 mmol·L1鲁米诺50μl, 1 mol·L1黄嘌呤200 μl，中药提取液适量，最后加入0.1 mol·L1黄嘌呤氧化酶启动反应，记录10 s积分发光强度(I)。以Vc做对照。同上述方法以不加中药提取液做空白测定10 s积分发光强度(I0)，重复上述测定。
2.3 乙醇提取物对O2自由基的抑制率抑制率=(I0-I)/I0×100%式中I0为空白发光强度，I为样品发光强度。样品对O2自由基的清除能力，一般用抑制率为50%时的样品加入量IC50来表示。IC50越小，对自由基清除能力越强。13种伞形科中药醇提取物对O2自由基的清除能力见表1。
表1 不同用量乙醇提取物对O2的清除作用(略)
3 讨论
超氧阴离子可以引起机体组织脂质过氧化，蛋白质解聚，多糖裂解等生化过程，引发组织病变加速机体衰老。补充外源性清除超氧阴离子的药物对机体的抗衰老作用有着重要的意义。13种伞形科中药均具有抗O2自由基的能力，其中羌活、川芎、柴胡醇提液抗O2的能力最强。这就为进一步开发抗衰老药物奠定了基础。实验结果显示13种伞形科中药乙醇提取液抗O2能力有明显的量效关系。虽然羌活、川芎提取液抗O2能力大于Vc，但这与每种中药提取液中抗O2有效成分的浓度有关。13种伞形科中药中抗O2有效成分有待进一步研究。传统中药方剂中，多用伞形科中药做补益药、活血化淤药[7]，以及古方中用于美白美容制剂。这显然与清除自由基作用有关。
参考文献：
[1] Simonian NA,Coyle JT. Oxidative Stress in neurodegenerative disease[J].Annu Rev pharmacol Toxicol,1996,36:83.
[2] 丁长海. 抗氧化自由基药物研究进展[J].中国药理通报，1992，8(5)；21.
[3] 段凤莲，赵克然. 宁 玉，等.中药清除氧自由基近况[J].中国中药，1999，24(6)：106.
[4] 郑少臣，蔡少青. 药用植物学与生药学[M].北京：人民卫生出版社，2004:354 .
[5] 韩 立，徐国钧. 汉拉英中草药名称[M].福州：福建科学技术出版社，1996：435.
[6] 钟进义，王传现，王建华. 化学发光法测定葡多酚超氧阴离子自由基清除[J].中华预防医学杂志，2001，35(3)：350.
[7] 许士凯.抗衰老药物学[M].北京：中国医药科技出版社，1995：200.
(华北煤炭医学院药学系，唐山市新药基础研究重点实验室，河北 唐山 063000), http://www.100md.com(潘海宇， 韩刚， 姜辉， 王传美)
关键词：超氧自由基； 抗氧化； 伞形科； 化学发光法
Study on Antioxidation of Umbelliferae Chinese Herbs
PAN Haiyu， HAN Gang， JIANG Hui， WANG Chuanmei
(Pharmaceutical Department,North China Coal Medical College,Tangshan Key Laboratory of Drug Research, Tangshan 063000,China)
Abstract：ObjectiveThe ability of antioxidation for 13 kinds of Umbelliferae has been studied.MethodsThe antioxidant activitise of the ethanol extractions of 13 Umbelliferac Chinese herb medicine were measured by chemiluminescence. ResultsThe ability that scavenges superoxide radical(O2)was Notopterygium forbesii Boiss. Conclusion13 kinds of Unbelliferae Chinese herb medicines can scavenge superoxide radical.
Key words：Superoxide free radical; Antioxidation; Umbelliferae; Chemiluminescence
随着自由基医学的发展，人们认识到多种疾病与自由基有关。机体在代谢过程中产生超氧阴离子自由基，过量的超氧阴离子自由基如不及时清除，在体内积累会产生细胞毒性[1]，破坏生物膜的结构和功能，引发多种疾病。寻找抗自由基活性成分的研究非常活跃[2]。我国植物资源非常丰富，许多中药有抗自由基作用[3]。我国约有伞形科植物95属，600种，已知药用的有230种[4]。伞形科植物常含挥发油、香豆素、三萜及黄酮类化合物。自古以来伞形科植物多用于活血，美白等方剂中。本研究对13种常用伞形科中药的乙醇提取液进行了抗超氧自由基能力的研究，为筛选抗衰老药物奠定基础。
1 仪器与材料
1.1 仪器FA4000电子天平(上海精科天平厂)，WDD2型发光仪(北京瑞利分析仪器厂)，KDC1042离心机(科大创新公司)，电热恒温水浴锅(上海医疗器械厂)，PHS3C型酸度计(上海大华仪器厂)。
1.2 试剂鲁米诺，黄嘌呤，黄嘌呤氧化酶购自Sigma公司，Vc购自北京双旋微生物培养基制品厂，其余试剂均为分析纯。
1.3 中药材 羌活Notopterygium forbesii boiss，川芎Ligusticum chuangxiong Hort，柴胡Bupleurum falcatum L.， 独活Angclica pubescens maxim.，蛇床子Cnidium monnieri(Li) Cusson，小茴香Foeniculum Vulgare Mill.，当归Angelica Sinensis diels，北沙参Glehnia Littoralis FR.，白芷Angelica Dahurica benth. Hook，藁本Ligusticum sinense Duver，白花前胡Peucedanum praeruptorum Dunn，防风Saposhnikovia divaricata，川党参Codonopsis tangshen Oliv[5]以上中药材均购自河北安国中药材市场，经药学系生药教研室鉴定，符合2000版药典标准。
2 方法与结果
2.1 中药提取液的制备 取中药材适量，粉碎，干燥器中干燥1 d，过40目筛。准确称取10 g中药粉末，于回流装置中，加入95%乙醇50 ml，电热套加热，两次回流提取；第1次回流2 h，第2次回流时乙醇用量与加热时间均减半。合并两次提取液，3 000 r·min1离心5 min，取上清液于100 ml容量瓶中定容，作为样品测试液。另取Vc配成5 mmol·L1作为对照液备用。
2.2 清除超氧自由基作用采用黄嘌呤黄嘌呤氧化酶鲁米诺产生O2自由基的发光体系进行测定[6]。在发光杯中依次加入pH=9.40，1 mol·L1Na2CO3NaHCO3缓冲溶液0.80 ml,1 mmol·L1鲁米诺50μl, 1 mol·L1黄嘌呤200 μl，中药提取液适量，最后加入0.1 mol·L1黄嘌呤氧化酶启动反应，记录10 s积分发光强度(I)。以Vc做对照。同上述方法以不加中药提取液做空白测定10 s积分发光强度(I0)，重复上述测定。
2.3 乙醇提取物对O2自由基的抑制率抑制率=(I0-I)/I0×100%式中I0为空白发光强度，I为样品发光强度。样品对O2自由基的清除能力，一般用抑制率为50%时的样品加入量IC50来表示。IC50越小，对自由基清除能力越强。13种伞形科中药醇提取物对O2自由基的清除能力见表1。
表1 不同用量乙醇提取物对O2的清除作用(略)
3 讨论
超氧阴离子可以引起机体组织脂质过氧化，蛋白质解聚，多糖裂解等生化过程，引发组织病变加速机体衰老。补充外源性清除超氧阴离子的药物对机体的抗衰老作用有着重要的意义。13种伞形科中药均具有抗O2自由基的能力，其中羌活、川芎、柴胡醇提液抗O2的能力最强。这就为进一步开发抗衰老药物奠定了基础。实验结果显示13种伞形科中药乙醇提取液抗O2能力有明显的量效关系。虽然羌活、川芎提取液抗O2能力大于Vc，但这与每种中药提取液中抗O2有效成分的浓度有关。13种伞形科中药中抗O2有效成分有待进一步研究。传统中药方剂中，多用伞形科中药做补益药、活血化淤药[7]，以及古方中用于美白美容制剂。这显然与清除自由基作用有关。
参考文献：
[1] Simonian NA,Coyle JT. Oxidative Stress in neurodegenerative disease[J].Annu Rev pharmacol Toxicol,1996,36:83.
[2] 丁长海. 抗氧化自由基药物研究进展[J].中国药理通报，1992，8(5)；21.
[3] 段凤莲，赵克然. 宁 玉，等.中药清除氧自由基近况[J].中国中药，1999，24(6)：106.
[4] 郑少臣，蔡少青. 药用植物学与生药学[M].北京：人民卫生出版社，2004:354 .
[5] 韩 立，徐国钧. 汉拉英中草药名称[M].福州：福建科学技术出版社，1996：435.
[6] 钟进义，王传现，王建华. 化学发光法测定葡多酚超氧阴离子自由基清除[J].中华预防医学杂志，2001，35(3)：350.
[7] 许士凯.抗衰老药物学[M].北京：中国医药科技出版社，1995：200.
(华北煤炭医学院药学系，唐山市新药基础研究重点实验室，河北 唐山 063000), http://www.100md.com(潘海宇， 韩刚， 姜辉， 王传美)