男性不育患者Y染色体AZF区域微缺失的STS位点分析
[摘要] 目的：研究男性不育患者的Y染色体无精症因子(azoospermiafactor，AZF)区域序列标签位点(sequence tag site，STS)缺失位点及其缺失特点，寻找适用于国内AZF微缺失常规检测使用的STS位点。方法：检索《中国医院知识仓库CHKD期刊全文库》自1994年以来的全部相关文献，并进行分析计算。结果：在采用的35篇文献中，采用PCR技术检测了AZF区域四个亚区的32个相关STS位点，共2 745例无精症和少精症患者，检出413例存在不同类型的微缺失，总缺失率15.05%。在四个AZF亚区中，AZFd和AZFc为缺失热区。结论：所推荐的AZF区域8个STS位点缺失与中国人原发无精和少精密切相关，可作为原发无精与少精症AZF区域微缺失常规检测的候选位点。
[关键词] 男性不育；Y染色体；AZF微缺失；STS
研究认为，世界范围内育龄夫妇中约有15%不能生育，其中男女因素各占50%左右[1]。引起男性不育的因素很多，生精障碍是最重要的原因之一，最常见的症状是无精症和少精症。近年来研究表明[2]，男性原发无精症和少精症患者中约有7%-15%存在Y染色体无精症因子(azoospermia factor，AZF)区域微缺失，是男性原发不育的一个重要原因。由于常规核型分析不易发现Y染色体的缺失，目前多采用PCR技术检测序列标签位点(sequence tag site，STS)，获取Y染色体AZF微缺失信息。Y染色体微缺失检测的问题是国内外都还没有标准的筛查方案，已报告可使用的STS位点在1个～131个之间。而STS缺失位点和范围在不同人种和不同民族人群间可存在差异，因此研究中国人STS缺失位点和范围对规范Y染色体微缺失的筛查有重要意义，我们就此对国内文献进行了研究分析。
1 资料与方法
1.1 资料
检索工具为《中国医院知识仓库CHKD期刊全文库》，检索自1994年以来的与Y染色体微缺失相关的全部文献，共检索出相关文献126篇。除外其中的综述类文献35篇和文中没有病例报告或未报告具体STS缺失位点的文献56篇，进入计算分析的文献只有35篇。
1.2 分析方法
提取每篇文献中报告的病例，收入标准是无精症和少精症(连续3次精液检查精子密度每毫升低于500万)患者，并排除存在染色体数目与结构异常、泌尿生殖道感染及激素水平异常等现象的患者。详细记录每例患者STS缺失的位点，计算总缺失率、分组缺失率和分区缺失率。统计各个STS位点的缺失频率，提出常规检测时采用的STS位点的建议。
2 结果
2.1 病例与分组
采用的35篇文献中共有2 745例患者，剔除未作无精症和少精症分组的4篇文献后，共检测了2 498例患者，其中无精症患者1 497例，少精症患者1 001例，同时检测了993例已生育男性作为正常对照。
2.2 检测的2 745例患者中，存在Y染色体微缺失的患者413例，总缺失率为15.05%。已作分组的无精症少精症患者2 498例中，检出Y染色体微缺失的患者373例，缺失率为14.93%。其中无精症患者1 497例中检出Y染色体微缺失217例，缺失率为14.5%，少精症患者1 001例中检出Y染色体微缺失156例，缺失率为15.6%。正常对照组993例已生育男性未检出微缺失。
2.3 AZF亚区微缺失
本研究收入的35篇文献中，共检测了32个STS位点，各亚区包括的STS位点见表1。各亚区检出的STS位点缺失数和阳性病例数见表2。表1 已检测的AZF各亚区所包括的STS位点AZF亚区(略)表2 AZF各亚区检出的STS位点缺失和阳性病(略)
2.4 不同STS位点的缺失
检测的2 745例患者中，各个STS位点检测的病例数、缺失检出数和缺失检出百分率见表3。
2.5 缺失率较高的STS位点
AZFa区有sY84和sY86，AZFb区有sY127和sY134，AZFd区有sY145和sY152，AZFc区有sY254和sY255。同时这8个STS位点的检测病例数量较多，比检出率更高但只检测几十个病例的位点有更好的可靠性。本祖数据中，这8个位点可检测出95%以上的缺失患者。表3 2 745例患者STS位点缺失的检出率(略)
3 讨论
无精症和少精症是男性不育的主要原因之一，而无精和少精与遗传因素有密切的关系。尽管尚未证实无精和少精与某一特定基因直接相关，但经过多年努力已在Y染色体上确定出部分候选基因。这些基因可能共同参与了生精过程，如果其中一些重要的基因发生变异就可能导致生精功能异常。研究证明，Y染色体AZF的微缺失与男性原发无精和少精症密切相关，1999年根据大量临床AZF微缺失分子流行病学研究资料，在欧洲形成了标准化的临床AZF微缺失筛查方案[3]，并在世界各地包括我国逐步得到普及应用。国内Y染色体微缺失检测目前尚无统一的筛查方案，文献报道所用的STS位点的数量和位点选择多不一致，因此Y染色体微缺失的检出率各不相同，可比性差。我们研究了国内已发表的相关文献，希望就Y染色体微缺失的发生率、缺失热区、STS位点选择与STS位点的检测个数等得出一些有意义的结论，以供制定国内Y染色体微缺失临床常规检测方案参考[1]。Y染色体微缺失筛查位点的选择：本研究中缺失率较高的STS位点8个，即sY84、sY86、sY127、sY134、sY254、sY255、sY145和sY152，这8个STS位点中的前6个也是欧洲筛查方案所推荐的位点。我们推荐这8个位点作为国内Y染色体微缺失筛查的参考位点，主要考虑一是它包含了欧洲推荐方案中的全部6个位点，二是这8个位点可检测出95%以上的缺失患者。三是考虑到微缺失通常涵盖一个以上的STS位点，每个亚区内至少应选取两个STS位点进行检测更能提高诊断的准确性。四是Y染色体微缺失目前一般采用多重PCR方法检测，以上位点与引物的选择使扩增片段的长度有较大差异，常规的琼脂糖电泳可以有效分离扩增片段，便于观察和判断结果[2]。本研究证明国内无精症和少精症Y染色体微缺失的总缺失率为15.05%，与国外报道[3]类似。在AZF四个亚区中，AZFc和AZFd为缺失热区。推荐的8个STS位点可作为常规检测使用，但还应经过更多的临床病例验证。
参考文献：
[1]KurodaKawaguchi T，Skaletsky H，Brown LG，et al.The AZFc region of the Y chromosome features massive palindromes and uniform recurrent deletions in infertilemen[J].Nat Genet，2001，29(3):279286.
[2]Shimizu A，Ichikawa T，Suzuki N，et al.Mlcrodeletlons in the Y chromosome of patients with idiopathic azoospermia[J].Asian J Androl，2002，4(2):111115.
[3]Simoni M，Bakker E，Eurlings MC，et al.Laboratory guidelines for molecular diagnosis of Ychromosomal microdeletions[J].Int J Androl，1999，22(5)：292299.
解放军第一七四医院，福建 厦门 361003, 百拇医药(周友泉，王厚照，刘芳，史彩虹，史化民)
[关键词] 男性不育；Y染色体；AZF微缺失；STS
研究认为，世界范围内育龄夫妇中约有15%不能生育，其中男女因素各占50%左右[1]。引起男性不育的因素很多，生精障碍是最重要的原因之一，最常见的症状是无精症和少精症。近年来研究表明[2]，男性原发无精症和少精症患者中约有7%-15%存在Y染色体无精症因子(azoospermia factor，AZF)区域微缺失，是男性原发不育的一个重要原因。由于常规核型分析不易发现Y染色体的缺失，目前多采用PCR技术检测序列标签位点(sequence tag site，STS)，获取Y染色体AZF微缺失信息。Y染色体微缺失检测的问题是国内外都还没有标准的筛查方案，已报告可使用的STS位点在1个～131个之间。而STS缺失位点和范围在不同人种和不同民族人群间可存在差异，因此研究中国人STS缺失位点和范围对规范Y染色体微缺失的筛查有重要意义，我们就此对国内文献进行了研究分析。
1 资料与方法
1.1 资料
检索工具为《中国医院知识仓库CHKD期刊全文库》，检索自1994年以来的与Y染色体微缺失相关的全部文献，共检索出相关文献126篇。除外其中的综述类文献35篇和文中没有病例报告或未报告具体STS缺失位点的文献56篇，进入计算分析的文献只有35篇。
1.2 分析方法
提取每篇文献中报告的病例，收入标准是无精症和少精症(连续3次精液检查精子密度每毫升低于500万)患者，并排除存在染色体数目与结构异常、泌尿生殖道感染及激素水平异常等现象的患者。详细记录每例患者STS缺失的位点，计算总缺失率、分组缺失率和分区缺失率。统计各个STS位点的缺失频率，提出常规检测时采用的STS位点的建议。
2 结果
2.1 病例与分组
采用的35篇文献中共有2 745例患者，剔除未作无精症和少精症分组的4篇文献后，共检测了2 498例患者，其中无精症患者1 497例，少精症患者1 001例，同时检测了993例已生育男性作为正常对照。
2.2 检测的2 745例患者中，存在Y染色体微缺失的患者413例，总缺失率为15.05%。已作分组的无精症少精症患者2 498例中，检出Y染色体微缺失的患者373例，缺失率为14.93%。其中无精症患者1 497例中检出Y染色体微缺失217例，缺失率为14.5%，少精症患者1 001例中检出Y染色体微缺失156例，缺失率为15.6%。正常对照组993例已生育男性未检出微缺失。
2.3 AZF亚区微缺失
本研究收入的35篇文献中，共检测了32个STS位点，各亚区包括的STS位点见表1。各亚区检出的STS位点缺失数和阳性病例数见表2。表1 已检测的AZF各亚区所包括的STS位点AZF亚区(略)表2 AZF各亚区检出的STS位点缺失和阳性病(略)
2.4 不同STS位点的缺失
检测的2 745例患者中，各个STS位点检测的病例数、缺失检出数和缺失检出百分率见表3。
2.5 缺失率较高的STS位点
AZFa区有sY84和sY86，AZFb区有sY127和sY134，AZFd区有sY145和sY152，AZFc区有sY254和sY255。同时这8个STS位点的检测病例数量较多，比检出率更高但只检测几十个病例的位点有更好的可靠性。本祖数据中，这8个位点可检测出95%以上的缺失患者。表3 2 745例患者STS位点缺失的检出率(略)
3 讨论
无精症和少精症是男性不育的主要原因之一，而无精和少精与遗传因素有密切的关系。尽管尚未证实无精和少精与某一特定基因直接相关，但经过多年努力已在Y染色体上确定出部分候选基因。这些基因可能共同参与了生精过程，如果其中一些重要的基因发生变异就可能导致生精功能异常。研究证明，Y染色体AZF的微缺失与男性原发无精和少精症密切相关，1999年根据大量临床AZF微缺失分子流行病学研究资料，在欧洲形成了标准化的临床AZF微缺失筛查方案[3]，并在世界各地包括我国逐步得到普及应用。国内Y染色体微缺失检测目前尚无统一的筛查方案，文献报道所用的STS位点的数量和位点选择多不一致，因此Y染色体微缺失的检出率各不相同，可比性差。我们研究了国内已发表的相关文献，希望就Y染色体微缺失的发生率、缺失热区、STS位点选择与STS位点的检测个数等得出一些有意义的结论，以供制定国内Y染色体微缺失临床常规检测方案参考[1]。Y染色体微缺失筛查位点的选择：本研究中缺失率较高的STS位点8个，即sY84、sY86、sY127、sY134、sY254、sY255、sY145和sY152，这8个STS位点中的前6个也是欧洲筛查方案所推荐的位点。我们推荐这8个位点作为国内Y染色体微缺失筛查的参考位点，主要考虑一是它包含了欧洲推荐方案中的全部6个位点，二是这8个位点可检测出95%以上的缺失患者。三是考虑到微缺失通常涵盖一个以上的STS位点，每个亚区内至少应选取两个STS位点进行检测更能提高诊断的准确性。四是Y染色体微缺失目前一般采用多重PCR方法检测，以上位点与引物的选择使扩增片段的长度有较大差异，常规的琼脂糖电泳可以有效分离扩增片段，便于观察和判断结果[2]。本研究证明国内无精症和少精症Y染色体微缺失的总缺失率为15.05%，与国外报道[3]类似。在AZF四个亚区中，AZFc和AZFd为缺失热区。推荐的8个STS位点可作为常规检测使用，但还应经过更多的临床病例验证。
参考文献：
[1]KurodaKawaguchi T，Skaletsky H，Brown LG，et al.The AZFc region of the Y chromosome features massive palindromes and uniform recurrent deletions in infertilemen[J].Nat Genet，2001，29(3):279286.
[2]Shimizu A，Ichikawa T，Suzuki N，et al.Mlcrodeletlons in the Y chromosome of patients with idiopathic azoospermia[J].Asian J Androl，2002，4(2):111115.
[3]Simoni M，Bakker E，Eurlings MC，et al.Laboratory guidelines for molecular diagnosis of Ychromosomal microdeletions[J].Int J Androl，1999，22(5)：292299.
解放军第一七四医院，福建 厦门 361003, 百拇医药(周友泉，王厚照，刘芳，史彩虹，史化民)