兰索拉唑脂质体的制备及性质的考察
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2007年3月5日
作者： 周臻(沈阳)
摘要 目的：研究兰索拉唑阳离子脂质体的制备方法和脂质体的性质。方法：采用正交设计筛选处方，乙醇注入法制备兰索拉唑脂质体；超滤法测定其包封率；用投射电镜观察脂质体的外观形态，并用粒径分析仪和Zeta电位仪分别测定脂质体的粒径和Zeta电位；进一步考察了脂质体的释放规律。结果：制得的脂质体包封率约为(80±1.23)%(n=3)；脂质体的形态为粒径均匀的球形和类球形，粒径为(154±21)nm(n=3)，Zeta电位为(36.1±5)mV(n=3)；脂质体的体外释放符合一级方程；具有较好的稳定性。结论：采用乙醇注入法，添加十八胺可制得具有较高包封率及稳定性的兰索拉唑阳离子脂质体，制得的脂质体体外释放具有缓释特点。
关键词：兰索拉唑；阳离子脂质体；包封率；体外释放
中图分类号：R944.9 文献标识码：A 文章编号：
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兰索拉唑(lansoprazole，LAP)是一种新型的抑制胃酸分泌的药物，对幽门螺杆菌也有抑制作用，在保护和促进胃粘膜溃疡愈合，降低溃疡复发率等方面具有良好作用[1，2]，临床上广泛用于十二指肠溃疡，胃溃疡，返流性食管炎等的治疗，疗效显著。
脂质体作为一种新的药物载体，能减少药物在体内与血浆蛋白的结合，使药物靶向于特定组织，提高药物治疗指数，减少药物不良反应。把LAP做成注射用脂质体后，既可满足不能口服给药的患者，又能提高疗效。
本实验通过添加十八胺制备了LAP阳离子脂质体，通过正交设计筛选了最佳处方，制得了包封率较高的LAP脂质体，并初步考察了其体外释放情况和稳定性。
材料与方法
1 仪器与试药
, http://www.100md.com 集热式恒温磁力搅拌器(浙江省乐成电器厂)，752C型紫外可见分光光度计(上海第三分析仪器厂)，ZRS-4智能溶出仪(天津大学无线电厂)，SHZ-D型循环水真空泵(河南巩义市英峪仪器厂)，ZETASIZER激光粒径分析仪(英国Malvern Instruments公司)，Delsa -440SX Zeta电位分析仪(美国贝克曼公司)，JEM-1230透射电镜(日本电子公司)。
兰索拉唑LAP(汕头经济特区鮀滨制药厂)，注射用大豆磷脂(Epikuron 200,德国Degussa公司)，胆固醇(天津博迪化工有限公司)，维生素E(浙江医药股份有限公司新昌制药厂)，十八胺(Fluka公司)，其他试剂均为市售分析纯。
2 实验方法
2.1 脂质体的处方筛选
在单因素考察的预实验结果的基础上，在制备LAP脂质体中，选择磷脂与药物的质量比(A)、磷脂与十八胺的质量比(B)、磷脂与胆固醇的质量比(C)、维生素E的量(D)4个主要因素为变量，每个因素又设定3个水平，进行正交设计，以包封率为考察指标来筛选处方。正交试验因素水平设计见表1，结果见表2。
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表1 正交试验的因素和水平
Tab 1. The design of orthogonal test
表2 正交试验结果
Tab 2. The results of orthogonal test
2.2 脂质体的制备
采用乙醇注入法制备LAP脂质体，定量称取磷脂、胆固醇、维生素E及十八胺溶于适量的乙醇中，所得类脂溶液缓慢匀速的注入到恒温40℃LAP水溶液中(调pH使溶解)，抽真空除去乙醇，得到乳白色混悬液，依次过0.45和0.22μm微孔滤膜后，即得LAP脂质体。
, 百拇医药
2.3 紫外分光光度法测定LAP脂质体药物的含量
2.3.1 最大吸收波长的确定 精密称取LAP适量用无水甲醇配成20μg/mL的溶液，以无水甲醇为对照，结果发现药物在284nm有最大吸收峰，而辅料在此无吸收，故确定284nm波长测定含药量。
2.3.2 标准曲线的制备 精密称取LAP适量配成105μg·m L-1 的储备液。分别精密移取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5和3mL该储备液于25mL量瓶中，加醇至刻度，配成浓度为2.1、4.2、6.3、8.4、10.5、12.6μg·mL-1的标准溶液，以无水甲醇为对照，在284nm处测定吸光度，以浓度C(μg·mL-1)对吸光度A进行线性回归处理。
2.3.3 回收率和精密度试验 按处方配比制备空白脂质体，加入含处方量药物溶液的量瓶中，以甲醇破乳，并稀释定容，使药物浓度分别为2.1、6.3和12.6μg·mL-1，测定吸光度计算回收率。同法制备上述溶液，于日内及日间测定吸光度并计算药物含量，考察方法的精密度。
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2.3.4 LAP脂质体药物含量测定 精密吸取脂质体样品0.2mL于10mL量瓶中，甲醇定容，测定吸光度，即可测定脂质体中药物的含量。
2.4 LAP脂质体包封率的测定
取LAP脂质体混悬液5.0mL至超滤器内，用超滤膜氮气加压超滤，收集续滤液，精密吸取续滤液适量，用甲醇稀释定容，测定吸光度，计算游离药物浓度，根据：
包封率/ % = 系统中包封药物的浓度(C总-C游离)/系统中总药物浓度(C总)×100%
计算LAP脂质体的包封率。
2.5 LAP脂质体的形态、粒径和Zeta电位测定
LAP脂质体样品适当稀释后，1%磷钨酸负染，于透射电镜下观察其形态并照相。另取LAP脂质体样品经适当稀释，用激光粒径分析仪和Zeta电位分析仪分别测定脂质体的平均粒径和Zeta电位。
, 百拇医药
2.6 LAP脂质体的体外释放
2.6.1 标准曲线的制备 精密配制55μg·mL-1的药物储备液，精密移取储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL于25mL量瓶中，用含10%甲醇的pH7.4磷酸盐缓冲液定容，得到浓度为1.1、2.2、3.3、4.4、5.5、6.6μg·mL-1的药物溶液，于284nm处测定吸光度。以浓度C(µg·mL-1)对吸光度线性回归，制得标准曲线。
2.6.2 药物释放的回收率 配制药物溶液1mg·mL-1，精密移取1mL入透析袋，两端扎牢，置于49mL含10%甲醇的pH7.4磷酸盐缓冲液中，磁力搅拌。一段时间后，取点测得吸收度值A1。另取药物溶液1mL直接稀释同样的倍数，测得吸收度值A2。按公式A1/A2×100%计算药物释放的回收率。
, 百拇医药
2.6.3 LAP脂质体中药物的释放 精密移取载药脂质体3mL置于透析袋内，扎牢两端，绑于溶出仪的搅拌桨上。按照中华人民共和国药典2005年版规定的溶出度测定释放度。释放条件：含10%甲醇的pH7.4磷酸盐缓冲液500mL，(37±0.5)℃，50r·min-1。定时取样5mL，并补充相同体积的介质。于284nm处测定样品吸光度值，同时取3mL药物溶液于透析袋，同样条件下释放作对比。根据：“2.6.1”项计算浓度，从而计算其累计释放量。
2.7 LAP脂质体的溶血试验
取兔血约8mL，分离红细胞，将所得红细胞以生理氯化钠溶液配成2%混悬液备用。1～6号试管分别加入0.1，0.2，0.3，0.4，0.5及0.0mL脂质体混悬液，再加入生理氯化钠溶液2.4，2.3，2.2，2.1，2.0，2.5mL，然后各管均加入2%红细胞混悬液2.5mL，摇匀，放置在37℃恒温箱中，记录0.5，1，2，3h的观察结果，以第6管为参比。
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2.8 初步稳定性考察
取LAP脂质体混悬液3批，在(4±2)℃条件下避光放置2个月，于试验期间的0，1，2月末取样，分别观察外观、含量、包封率、粒径的变化。
结果
1 LAP脂质体的最佳处方
实验结果表明，各因素的影响程度为A>B>D>C,最优组合为A3B1C2D1，即磷脂与药物质量比为30:1,磷脂与十八胺质量比为20:1，磷脂与胆固醇质量比为4:1，维生素E为0.01g。
2 LAP脂质体含量测定结果
, 百拇医药 在2.1～12.6µg·mL-1范围内线性良好，回归方程为C=20.75A-0.025(r=0.9998,n=3)。低、中、高浓度(2.1、6.3、12.6µg·mL-1)的方法回收率分别为(101.13±0.58)%,(98.84±0.33)%,(100.37±0.30)%；低、中、高浓度的日内RSD分别为0.68%,0.69%,0.27%,日间RSD分别为0.61%,0.70%,0.12%。测得脂质体中LAP含量为(1.45±0.4)mg·mL-1。
3 LAP脂质体包封率的测定结果
自制3批LAP脂质体，同“2.4”项方法操作，通过超滤方法分离游离药物，测得游离药物浓度。同“2.3.4”项方法测定LAP脂质体的药物含量，代入公式计算包封率为(80±1.23)%(n=3)。
, http://www.100md.com 4 LAP脂质体的形态、粒径和Zeta电位测定结果
测得脂质体的平均粒径为(154±21)nm(n=3)，Zeta电位为(36.1±5)mV(n=3),粒径分布见图1。由电镜照片可见脂质体外观圆整，多为球形及类球形粒子，粒径分布较均匀，见图2。
图1 LAP脂质体粒径分布图
Fig 1. Size distribution profiles of LAP liposomes
图2 LAP脂质体电镜照片
Fig 2. Transmission electron photomicrograms of LAP liposomes
5 LAP脂质体的体外释放
, 百拇医药
5.1 标准曲线 在1.1～6.6µg·mL-1的浓度范围内，线性良好，回归方程为C=22.059A+0.386(r=0.9998,n=3)，专属性良好。
5.2 释放度试验结果 根据“2.6.2”测得药物释放的回收率为(99.28±0.54)%，符合释放要求。脂质体释放度试验结果如图3所示。
图3 LAP脂质体及游离药物累积释放结果
Fig 3. Cumulative release of LAP liposomes and free LAP
体外释放实验的结果表明，LAP脂质体在含10%甲醇pH7.4缓冲液中释放较缓慢，在前4h的累积释放量为60%左右，而作为对比的溶液剂在4h就几乎释放完全。LAP脂质体具有一定的缓释效果。在含10%甲醇pH7.4缓冲液中，其释放曲线符合一级方程：
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Ln(1-Q)=-0.2338t +4.5598(R2=0.9911)。
6 脂质体的溶血试验结果
在此实验中，各管3h后均没有溶血现象发生，经显微镜观察红细胞没有破损现象，说明该脂质体在体外实验中不存在溶血毒性。
7 初步稳定性考察结果
LAP脂质体在(4±2)℃条件下，避光放置2个月后，外观没有发生明显的改变，药物含量没有变化。0、1、2月的包封率分别为81.58%,80.35%,79.02%；粒径分别为162.1,164.3,168.4nm。可以看出低温避光放置2个月，兰索拉唑的外观、含量、包封率及粒径没有明显变化，脂质体具有较好的稳定性。
讨论
, 百拇医药
本实验在传统的乙醇注入法的基础上，加入正电荷脂质十八胺，制得了包封率较高、稳定性较好的LAP阳离子脂质体。随着十八胺的用量的增加，包封率显著增加，从45.12%到80.25%。添加十八胺能改变脂质体表面荷电性，其Zeta为36.1mV。
乙醇注入法简单，包封率较高，重现性较好。在本实验中，操作温度比较低(40℃)，这是因为LAP不稳定[3]，在此温度下，能避免药物的高温分解。乙醇注入法制备后的脂质体粒径较不均匀，因此将脂质体过0.22µm微孔滤膜挤出，挤出后的脂质体粒径均一，稳定性好。挤出法与超声法、微射流等方法相比，可避免高能耗、高热量对磷脂的破坏，使制剂更稳定，且此方法易于放大，可根据选择滤膜的大小，制备不同粒径大小的脂质体。
因为LAP是脂溶性药物，在pH7.4缓冲液中溶解度极小，因此在选择透析介质时考虑使用不同浓度的甲醇溶液。在实验中发现10%的甲醇溶液能将一个处方量的LAP游离药物完全溶解[4，5]，即对游离LAP有一定的溶解能力，且在平衡时间内不造成脂质体的渗漏，故选择10%甲醇溶液为平衡透析介质。
, 百拇医药
本实验完成了LAP脂质体处方筛选和体外释放，所制得的脂质体包封率为80%，并初步考察了LAP脂质体的稳定性以及体外溶血试验，有关的工作正在进一步进行。
参考文献：
[1] Xu Hua，Yu Li-ping，Wen Jie,et al.Effect of lansoprazole on gastric ulceration in rats[J].Chinese Journal of Pathophysiology(中国病理生理杂志)，2002，18(6)：698-700.
[2] Zhang Lei-ping，Bai Xue-jiao，Zai Yan-qing.Study of ranitidine lansoprazole and magaldrate on experimental gastric ulceration[J].Proceeding of Clinical Medicine J (临床医药实践杂志)，2004，13(4)：257-258.
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[3]Albin Kristl,Franc Vrecer. Preformulation investigation of the novel proton pump inhibitor lansoprazole[J].Drug Development and Industrial Pharmacy,26(7):781-783(2000).
[4]Zheng Ying，Zhu Jia-bi.Quality evaluation of nimodipine nanoliposomes freeze-dried powder [J].Chin Pharm J(中国药学杂志)，2004，39(7)：528-530.
[5]Zhang Zi-qiang，Zhu Jia-bi，Yao Jing.Study on preparation and release of nimodipine proliposome tablets [J].J China Pharm Univ(中国药科大学学报)，2003，34(6)：514-517., 百拇医药
摘要 目的：研究兰索拉唑阳离子脂质体的制备方法和脂质体的性质。方法：采用正交设计筛选处方，乙醇注入法制备兰索拉唑脂质体；超滤法测定其包封率；用投射电镜观察脂质体的外观形态，并用粒径分析仪和Zeta电位仪分别测定脂质体的粒径和Zeta电位；进一步考察了脂质体的释放规律。结果：制得的脂质体包封率约为(80±1.23)%(n=3)；脂质体的形态为粒径均匀的球形和类球形，粒径为(154±21)nm(n=3)，Zeta电位为(36.1±5)mV(n=3)；脂质体的体外释放符合一级方程；具有较好的稳定性。结论：采用乙醇注入法，添加十八胺可制得具有较高包封率及稳定性的兰索拉唑阳离子脂质体，制得的脂质体体外释放具有缓释特点。
关键词：兰索拉唑；阳离子脂质体；包封率；体外释放
中图分类号：R944.9 文献标识码：A 文章编号：
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兰索拉唑(lansoprazole，LAP)是一种新型的抑制胃酸分泌的药物，对幽门螺杆菌也有抑制作用，在保护和促进胃粘膜溃疡愈合，降低溃疡复发率等方面具有良好作用[1，2]，临床上广泛用于十二指肠溃疡，胃溃疡，返流性食管炎等的治疗，疗效显著。
脂质体作为一种新的药物载体，能减少药物在体内与血浆蛋白的结合，使药物靶向于特定组织，提高药物治疗指数，减少药物不良反应。把LAP做成注射用脂质体后，既可满足不能口服给药的患者，又能提高疗效。
本实验通过添加十八胺制备了LAP阳离子脂质体，通过正交设计筛选了最佳处方，制得了包封率较高的LAP脂质体，并初步考察了其体外释放情况和稳定性。
材料与方法
1 仪器与试药
, http://www.100md.com 集热式恒温磁力搅拌器(浙江省乐成电器厂)，752C型紫外可见分光光度计(上海第三分析仪器厂)，ZRS-4智能溶出仪(天津大学无线电厂)，SHZ-D型循环水真空泵(河南巩义市英峪仪器厂)，ZETASIZER激光粒径分析仪(英国Malvern Instruments公司)，Delsa -440SX Zeta电位分析仪(美国贝克曼公司)，JEM-1230透射电镜(日本电子公司)。
兰索拉唑LAP(汕头经济特区鮀滨制药厂)，注射用大豆磷脂(Epikuron 200,德国Degussa公司)，胆固醇(天津博迪化工有限公司)，维生素E(浙江医药股份有限公司新昌制药厂)，十八胺(Fluka公司)，其他试剂均为市售分析纯。
2 实验方法
2.1 脂质体的处方筛选
在单因素考察的预实验结果的基础上，在制备LAP脂质体中，选择磷脂与药物的质量比(A)、磷脂与十八胺的质量比(B)、磷脂与胆固醇的质量比(C)、维生素E的量(D)4个主要因素为变量，每个因素又设定3个水平，进行正交设计，以包封率为考察指标来筛选处方。正交试验因素水平设计见表1，结果见表2。
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表1 正交试验的因素和水平
Tab 1. The design of orthogonal test
| level | factor |
| A B C D(g) | |
| 1 2 3 | 10:1 20:1 2:1 0.01 20:1 30:1 4:1 0.02 , 百拇医药 30:1 40:1 6:1 0.03 |
表2 正交试验结果
Tab 2. The results of orthogonal test
| number A B C D EE(%) |
| 1 1 1 1 1 72.02 2 1 2 2 2 56.58 , http://www.100md.com 3 1 3 3 3 45.23 4 2 1 2 3 77.46 5 2 2 3 1 74.69 6 2 3 1 2 54.45 7 3 1 3 2 82.20 8 3 2 1 3 71.05 , http://www.100md.com 9 3 3 2 1 78.41 Ⅰj 173.83 231.68 197.52 225.12 Ⅱj 206.6 202.32 212.45 193.23 Ⅲj 231.66 178.09 202.12 193.74 Ⅰ(—)j 57.94 77.23 65.84 75.04 , http://www.100md.com Ⅱ(—)j 68.87 67.44 70.82 64.41 Ⅲ(—)j 77.22 59.36 67.37 64.58 R j 19.28 17.87 4.98 10.63 |
2.2 脂质体的制备
采用乙醇注入法制备LAP脂质体，定量称取磷脂、胆固醇、维生素E及十八胺溶于适量的乙醇中，所得类脂溶液缓慢匀速的注入到恒温40℃LAP水溶液中(调pH使溶解)，抽真空除去乙醇，得到乳白色混悬液，依次过0.45和0.22μm微孔滤膜后，即得LAP脂质体。
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2.3 紫外分光光度法测定LAP脂质体药物的含量
2.3.1 最大吸收波长的确定 精密称取LAP适量用无水甲醇配成20μg/mL的溶液，以无水甲醇为对照，结果发现药物在284nm有最大吸收峰，而辅料在此无吸收，故确定284nm波长测定含药量。
2.3.2 标准曲线的制备 精密称取LAP适量配成105μg·m L-1 的储备液。分别精密移取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5和3mL该储备液于25mL量瓶中，加醇至刻度，配成浓度为2.1、4.2、6.3、8.4、10.5、12.6μg·mL-1的标准溶液，以无水甲醇为对照，在284nm处测定吸光度，以浓度C(μg·mL-1)对吸光度A进行线性回归处理。
2.3.3 回收率和精密度试验 按处方配比制备空白脂质体，加入含处方量药物溶液的量瓶中，以甲醇破乳，并稀释定容，使药物浓度分别为2.1、6.3和12.6μg·mL-1，测定吸光度计算回收率。同法制备上述溶液，于日内及日间测定吸光度并计算药物含量，考察方法的精密度。
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2.3.4 LAP脂质体药物含量测定 精密吸取脂质体样品0.2mL于10mL量瓶中，甲醇定容，测定吸光度，即可测定脂质体中药物的含量。
2.4 LAP脂质体包封率的测定
取LAP脂质体混悬液5.0mL至超滤器内，用超滤膜氮气加压超滤，收集续滤液，精密吸取续滤液适量，用甲醇稀释定容，测定吸光度，计算游离药物浓度，根据：
包封率/ % = 系统中包封药物的浓度(C总-C游离)/系统中总药物浓度(C总)×100%
计算LAP脂质体的包封率。
2.5 LAP脂质体的形态、粒径和Zeta电位测定
LAP脂质体样品适当稀释后，1%磷钨酸负染，于透射电镜下观察其形态并照相。另取LAP脂质体样品经适当稀释，用激光粒径分析仪和Zeta电位分析仪分别测定脂质体的平均粒径和Zeta电位。
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2.6 LAP脂质体的体外释放
2.6.1 标准曲线的制备 精密配制55μg·mL-1的药物储备液，精密移取储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL于25mL量瓶中，用含10%甲醇的pH7.4磷酸盐缓冲液定容，得到浓度为1.1、2.2、3.3、4.4、5.5、6.6μg·mL-1的药物溶液，于284nm处测定吸光度。以浓度C(µg·mL-1)对吸光度线性回归，制得标准曲线。
2.6.2 药物释放的回收率 配制药物溶液1mg·mL-1，精密移取1mL入透析袋，两端扎牢，置于49mL含10%甲醇的pH7.4磷酸盐缓冲液中，磁力搅拌。一段时间后，取点测得吸收度值A1。另取药物溶液1mL直接稀释同样的倍数，测得吸收度值A2。按公式A1/A2×100%计算药物释放的回收率。
, 百拇医药
2.6.3 LAP脂质体中药物的释放 精密移取载药脂质体3mL置于透析袋内，扎牢两端，绑于溶出仪的搅拌桨上。按照中华人民共和国药典2005年版规定的溶出度测定释放度。释放条件：含10%甲醇的pH7.4磷酸盐缓冲液500mL，(37±0.5)℃，50r·min-1。定时取样5mL，并补充相同体积的介质。于284nm处测定样品吸光度值，同时取3mL药物溶液于透析袋，同样条件下释放作对比。根据：“2.6.1”项计算浓度，从而计算其累计释放量。
2.7 LAP脂质体的溶血试验
取兔血约8mL，分离红细胞，将所得红细胞以生理氯化钠溶液配成2%混悬液备用。1～6号试管分别加入0.1，0.2，0.3，0.4，0.5及0.0mL脂质体混悬液，再加入生理氯化钠溶液2.4，2.3，2.2，2.1，2.0，2.5mL，然后各管均加入2%红细胞混悬液2.5mL，摇匀，放置在37℃恒温箱中，记录0.5，1，2，3h的观察结果，以第6管为参比。
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2.8 初步稳定性考察
取LAP脂质体混悬液3批，在(4±2)℃条件下避光放置2个月，于试验期间的0，1，2月末取样，分别观察外观、含量、包封率、粒径的变化。
结果
1 LAP脂质体的最佳处方
实验结果表明，各因素的影响程度为A>B>D>C,最优组合为A3B1C2D1，即磷脂与药物质量比为30:1,磷脂与十八胺质量比为20:1，磷脂与胆固醇质量比为4:1，维生素E为0.01g。
2 LAP脂质体含量测定结果
, 百拇医药 在2.1～12.6µg·mL-1范围内线性良好，回归方程为C=20.75A-0.025(r=0.9998,n=3)。低、中、高浓度(2.1、6.3、12.6µg·mL-1)的方法回收率分别为(101.13±0.58)%,(98.84±0.33)%,(100.37±0.30)%；低、中、高浓度的日内RSD分别为0.68%,0.69%,0.27%,日间RSD分别为0.61%,0.70%,0.12%。测得脂质体中LAP含量为(1.45±0.4)mg·mL-1。
3 LAP脂质体包封率的测定结果
自制3批LAP脂质体，同“2.4”项方法操作，通过超滤方法分离游离药物，测得游离药物浓度。同“2.3.4”项方法测定LAP脂质体的药物含量，代入公式计算包封率为(80±1.23)%(n=3)。
, http://www.100md.com 4 LAP脂质体的形态、粒径和Zeta电位测定结果
测得脂质体的平均粒径为(154±21)nm(n=3)，Zeta电位为(36.1±5)mV(n=3),粒径分布见图1。由电镜照片可见脂质体外观圆整，多为球形及类球形粒子，粒径分布较均匀，见图2。
图1 LAP脂质体粒径分布图
Fig 1. Size distribution profiles of LAP liposomes
图2 LAP脂质体电镜照片
Fig 2. Transmission electron photomicrograms of LAP liposomes
5 LAP脂质体的体外释放
, 百拇医药
5.1 标准曲线 在1.1～6.6µg·mL-1的浓度范围内，线性良好，回归方程为C=22.059A+0.386(r=0.9998,n=3)，专属性良好。
5.2 释放度试验结果 根据“2.6.2”测得药物释放的回收率为(99.28±0.54)%，符合释放要求。脂质体释放度试验结果如图3所示。
图3 LAP脂质体及游离药物累积释放结果
Fig 3. Cumulative release of LAP liposomes and free LAP
体外释放实验的结果表明，LAP脂质体在含10%甲醇pH7.4缓冲液中释放较缓慢，在前4h的累积释放量为60%左右，而作为对比的溶液剂在4h就几乎释放完全。LAP脂质体具有一定的缓释效果。在含10%甲醇pH7.4缓冲液中，其释放曲线符合一级方程：
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Ln(1-Q)=-0.2338t +4.5598(R2=0.9911)。
6 脂质体的溶血试验结果
在此实验中，各管3h后均没有溶血现象发生，经显微镜观察红细胞没有破损现象，说明该脂质体在体外实验中不存在溶血毒性。
7 初步稳定性考察结果
LAP脂质体在(4±2)℃条件下，避光放置2个月后，外观没有发生明显的改变，药物含量没有变化。0、1、2月的包封率分别为81.58%,80.35%,79.02%；粒径分别为162.1,164.3,168.4nm。可以看出低温避光放置2个月，兰索拉唑的外观、含量、包封率及粒径没有明显变化，脂质体具有较好的稳定性。
讨论
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本实验在传统的乙醇注入法的基础上，加入正电荷脂质十八胺，制得了包封率较高、稳定性较好的LAP阳离子脂质体。随着十八胺的用量的增加，包封率显著增加，从45.12%到80.25%。添加十八胺能改变脂质体表面荷电性，其Zeta为36.1mV。
乙醇注入法简单，包封率较高，重现性较好。在本实验中，操作温度比较低(40℃)，这是因为LAP不稳定[3]，在此温度下，能避免药物的高温分解。乙醇注入法制备后的脂质体粒径较不均匀，因此将脂质体过0.22µm微孔滤膜挤出，挤出后的脂质体粒径均一，稳定性好。挤出法与超声法、微射流等方法相比，可避免高能耗、高热量对磷脂的破坏，使制剂更稳定，且此方法易于放大，可根据选择滤膜的大小，制备不同粒径大小的脂质体。
因为LAP是脂溶性药物，在pH7.4缓冲液中溶解度极小，因此在选择透析介质时考虑使用不同浓度的甲醇溶液。在实验中发现10%的甲醇溶液能将一个处方量的LAP游离药物完全溶解[4，5]，即对游离LAP有一定的溶解能力，且在平衡时间内不造成脂质体的渗漏，故选择10%甲醇溶液为平衡透析介质。
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本实验完成了LAP脂质体处方筛选和体外释放，所制得的脂质体包封率为80%，并初步考察了LAP脂质体的稳定性以及体外溶血试验，有关的工作正在进一步进行。
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