差异表达基因的几种筛选方法
mRNA差异显示；基因表达；DNA微阵列,,mRNA差异显示；基因表达；DNA微阵列,0引言,1mRNA差异显示PCR(differentialdisplayPCR，DDPCR),2代表性差异分析(representationaldifferenceanalysi
【摘要】 多种因素导致的基因差异性表达与疾病的发生发展密切有关，分离差异表达基因，对于研究细胞生命过程的调节机制及致病机制具有重要意义. 20世纪90年代以来，先后出现了mRNA差异显示PCR(mRNA DDRTPCR)、代表性差异分析(RDA)、抑制性消减杂交(SSH)、基因表达连续性分析(SAGE)和DNA微阵列(DNA microarray)等多种分析差别表达基因的方法. 我们对以上方法的原理、基本步骤及其应用进行简要综述.【关键词】 mRNA差异显示；基因表达；DNA微阵列
0引言
随着各类基因组计划的相继完成，人类面临的更艰巨的任务是研究基因功能活动，也就是说基因组序列分析仅仅代表了遗传信息复杂性的一个层次，而遗传信息有序地、时相地表达则是决定生物体及其行为的另一个层次. 所以，发现不同生物体及其组织在各种状态下(正常状态、发育、衰老、损伤及疾病)差异表达的基因具有十分重要的意义，于是差异表达基因筛选技术应运而生. 目前，基因表达差异的分析通常用稳定状态下mRNA的丰度高低及有无进行比较. 差异表达基因有两个含义，即表达基因的种类变化和基因表达量的变化. 传统的基因分析方法如Northern杂交、斑点杂交等存在费时、费力的缺点，已不适宜进行大规模基因表达分析研究的需要. 因此随着分子生物学的发展，出现了大量新方法，按其技术特点可分为三类：①以杂交为基础的技术，包括Northern blotting，Slmapping/Rnase保护、抑制性消减杂交和DNA微阵列；②以PCR为基础的技术，如差异显示PCR(DDPCR)、代表性差异分析(RDA)；③以测序为基础的技术，如表达序列标签(EST)、基因表达连续性分析(SAGE)等. 我们对目前主要的差异表达基因的筛选方法作一综述.
1mRNA差异显示PCR(differential display PCR，DDPCR)
mRNA差异显示PCR又称为差别显示反转录PCR(differential display reverse transcription PCR, DDRTPCR). DDRTPCR技术[1-3]最早于1992年出现，可以用于分离在不同的真核细胞中差异表达的cDNA并加以克隆. 其原理是将两种细胞的mRNA逆转录后进行PCR扩增. PCR 3′端引物序列是针对mRNA的poly(A)尾设计的，一般是11个T再加上两个碱基，这样12种3′端引物(T11AA，T11AC, T11AG，T11AT ......
您现在查看是摘要页，全文长 13902 字符。