超滤法处理改善小鼠单抗的固定化效果陈韵晴
抗体,固定化,超滤,蛋白质芯片,,抗体，固定化，超滤，蛋白质芯片,关键词抗体，固定化，超滤，蛋白质芯片,1引言,2实验部分,3结果与讨论,References
摘 要 商品化小鼠单抗试剂中普遍添加了高浓度的保护蛋白，如牛血清白蛋白(BSA)，这给抗体的固定化带来了严重的干扰。本研究基于超滤技术发展了一种超微量抗体试剂(用量为10 μL，约含2 μg抗体、100 μg BSA)预处理方法，能有效去除商品化抗体试剂中的高浓度BSA，使微珠表面固定化小鼠单抗的数量显著提高，并在蛋白质检测中得到了较好的结果，为缓解抗体产品供应现状对蛋白质芯片研究工作的制约提供了一条简单实用的途径。关键词 抗体，固定化，超滤，蛋白质芯片
1 引 言
抗体的固定化是蛋白质芯片研究的一个重要内容。目前，在固定化技术方面已建立了多种相对完备和简单的方法\[1\]，而选择适合芯片研究的商品化抗体试剂却较困难。为了防止低浓度抗体在储存中变性失活,或在容器表面吸附而损失\[2\]，商品化小鼠单抗试剂普遍添加了高浓度保护蛋白，如牛血清白蛋白(BSA)，质量浓度甚至可能高达抗体的50倍。然而，多数固定化方法都是通过氨基酸残基上的氨基、巯基、羧基等将蛋白质与固相表面共价结合，这时高浓度保护蛋白将严重干扰抗体与固相表面的结合。固相免疫分析实验多采用纯化的抗体，以提高分析灵敏度和测量范围\[3\]。因此，温和、有效地去除保护蛋白，改善这些小鼠单抗的固定化效果，可以为实验室的蛋白质芯片研究提供便利，降低研究成本。在抗体纯化方面，层析、硫酸铵沉淀、辛酸硫酸铵沉淀等已作为常规技术，广泛应用于免疫球蛋白G(IgG)与血清蛋白质的分离\[4, 5\]；此外，有少数文献报道了BSA和IgG的超滤分离\[6, 7\]。但是已有的抗体纯化研究集中于成分较复杂、样品量较大的处理过程，没有文献表明这些方法能够从少至数微升的抗体试剂中将微量IgG和高浓度BSA有效地分离。超滤是一种以压差为驱动力的膜分离技术。其操作简单、条件温和，有利于保持生物分子的活性。因此，在蛋白质样品处理中具有独特的优点\[8\]。此外，其规模灵活，可用于处理少至微升级的样品。但是，由于分离精度不高，其应用局限于脱盐、浓缩、更换缓冲液，而极少用于分子量相近的蛋白质的分离纯化\[7\]。本研究基于离心超滤技术对10 μL约含2 μg抗体、100 μg BSA的商品化小鼠单抗试剂进行超滤 ......
您现在查看是摘要页，全文长 8709 字符。