纤维素金属螯合物及其质谱分析在研究血清蛋白质与多肽中的应用
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摘 要 用纤维素做固相支持物，通过碱处理、环氧活化、偶联螯合剂、固定金属离子等方法制成纤维素金属螯合物，并用合成的纤维素金属螯合物处理健康人血清，然后通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDITOFMS)检测蛋白质和多肽以确定其分离效果。确定了最佳的合成方法、螯合剂、金属离子和缓冲体系。再利用普通的纤维素制成了性能优良的纤维素金属螯合物，它能较好地分离血清中的蛋白质和多肽。关键词 纤维素，金属螯合亲合层析，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪，血清
1 引 言
金属螯合亲和层析，是近20多年来发展起来的新型分离技术，最早由Paroth等\[1,2\]提出。其原理是利用蛋白质表面的组氨酸、色氨酸或半胱氨酸等与金属离子产生配位结合，由于蛋白质表面这些氨基酸的种类、位置和空间构象不同，因而与金属螯合物的亲和力大小不同，从而可选择性地加以分离纯化。在临床血清蛋白质组学研究中，血清样品的处理是关键。样品处理的好坏，直接关系到质谱分析的结果。但现在分离血清的蛋白芯片或磁珠成本昂贵，一般研究者难以承受，为降低成本，本研究用纤维素做固相支持物，通过碱处理、环氧活化、偶联螯合剂、固定金属离子等步骤研制成了纤维素金属螯合物\[3～5\]，并与配置的缓冲液相结合，可用于分离血清中的蛋白质和多肽(﹤10 kDa)，其分离效果与国外公司所生产的磁珠试剂盒相当，但成本却只有国外产品的几十分之一。此方法的优点是分离血清后，结合质谱鉴定技术可直接发现生物标志物；通量高，所需样品只有20 μL;检测过程简便；特异性高，不会破坏所测定的蛋白质。
2 实验部分
2.1 仪器和试剂基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDITOFMS)(Autoflex; Bruker公司)；傅立叶变换红外光谱仪(FTS65A ......
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