BoIL18成熟蛋白基因;杆状病毒表达载体系统;

牛IL18成熟蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其活性

http://www.100md.com 《细胞与分子免疫学杂志》 2007年第3期

BoIL18成熟蛋白基因;杆状病毒表达载体系统;,昆虫细胞;,生物学活性,,]BoIL18成熟蛋白基因;杆状病毒表达载体系统;,昆虫细胞;,生物学活性,1材料和方法,2结果,3讨论,参考文献:

     [摘要] 目的: 在杆状病毒表达载体中表达牛白细胞介素18(bovine interleukine18, BoIL18)成熟蛋白基因, 并鉴定其生物学活性。方法: 设计一对特异性引物, 将编码BoIL18的成熟蛋白基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac HTb上, 构建重组质粒repFastBac HTb18, 转化至DH10Bac感受态细胞中得到重组Bacmid(BacmidBoIL18)。在Cellfectin作用下, 将BacmidBoIL18转染昆虫细胞sf9获得重组杆状病毒, 然后将重组杆状病毒感染sf9, 感染后不同时间收获sf9细胞, 进行SDSPAGE电泳, 分析表达情况; 用BoIL18的原核表达产物作为抗原制备的兔多克隆抗体进行Western blot分析; 将纯化的表达产物对牛外周血单个核细胞(PBMC)进行细胞增殖试验, 对健康牛脾进行IFNγ诱生试验, 初步分析表达产物的生物学活性。结果: BoIL18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达, 经薄层凝胶扫描分析证实, 表达量占总蛋白的213%; Western blot分析证明, 在相对分子质量(Mr)约为26000处有一条特异性条带。生物学活性分析表明, 纯化的表达产物可明显增强淋巴细胞增殖, 促进IFNγ的产生。结论: BoIL18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达, 表达产物具有良好的生物学活性。

    [关键词]BoIL18成熟蛋白基因;杆状病毒表达载体系统; 昆虫细胞; 生物学活性

    白细胞介素18(IL18)是Okamura等[1]首次从小鼠肝脏中克隆获得的,除能强烈地诱导免疫细胞释放IFNγ、 GMCSF、 TNFα等多种细胞因子外, 也具有增加FasL 的表达以及增强NK细胞毒性作用等多种生物学效能, 在免疫调节、抗感染及慢性炎症性疾病发病过程中起着重要作用[2]。杆状病毒表达载体系统是最具有应用前景的真核表达系统之一。它具有对外源基因容量大, 操作方便、不污染环境等优点, 并且能使表达产物得到充分地翻译后修饰。本实验室已经构建了牛白细胞介素18(BoIL18)的重组质粒PMDTBoIL18, 在此基础上设计一对特异性引物, 通过PCR扩增, 将BoIL18的成熟蛋白基因亚克隆到杆状病毒表达载体, 通过转染昆虫细胞sf9, 得到了BoIL18的高效表达产物; 经对牛PBMC的增殖与对脾IFNγ的诱生试验证实, 表达产物具有良好的生物学活性, 为进一步研究及应用BoIL18提供了实验依据 ......

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