小鼠OCILrP2基因的克隆、 原核表达及抗血清的制备
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\[摘 要\] 目的: 在原核系统中表达破骨细胞抑制凝集素家族成员之一OCILrP2基因, 并制备大鼠抗OCILrP2的抗血清。方法: 应用RTPCR从小鼠脾细胞中克隆的部分OCILrP2 cDNA, 构建重组表达载体pET28aOCILrP2, 并转化大肠杆菌BL21(DE3), 以IPTG诱导表达HisOCILrP2融合蛋白。以表达产物免疫SD大鼠, 制备大鼠抗OCILrP2的抗血清。采用Western blot测定其效价和特异性。结果: RTPCR法扩增出235 bp的OCILrP2基因, 其cDNA序列与GenBank中登录的序列一致。以构建的重组质粒pET28aOCILrP2转化大肠杆菌获得目的蛋白的高表达。以表达的HisOCILrP2融合蛋白免疫大鼠获得抗小鼠OCILrP2的抗血清。Western blot分析表明, 该抗血清均可与原核表达的HisOCILrP2融合蛋白和真核表达的OCILrP2Ig融合蛋白特异性结合; 抗血清的效价为1∶2000。结论: 在原核细胞中表达了小鼠的OCILrP2蛋白, 制备了大鼠抗小鼠OCILrP2的抗血清, 为进一步研究OCILrP2的生物学功能奠定了基础。\[关键词\]小鼠OCILrP2; 原核表达; 抗OCILrP2抗血清
破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2(osteoclast inhibitory lectinrelated protein 2, OCILrP2)是破骨细胞抑制凝集素(OCIL)家族的成员之一, 属于Ⅱ型跨膜糖蛋白, 具有1个较小的胞内区, 胞外区含有1个C型凝集素结构域。小鼠OCILrP2基因位于6号染色体的NK基因复合体内。此复合体存在很多C型凝集素相关基因, 包括CD69、 NKG2家族及Ly49家族及NKRP1家族等 ......
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