摘要: 目的 评价bcl-2反义硫代磷酸寡核酸(ASODN)对骨髓造血功能的影响。 方法 正常骨髓与含终浓度为10mol/L的bcl-2ASODN共培养12h，以处理后的骨髓细胞为反义组;空白对照组除不加ASODN外处理与反义组相同。分别以2组骨髓细胞建立短期与长期培养体系，动态观察粒、单核系集落形成单位(CFU-GM)的形态和产率;培养结束时，非贴壁细胞以流式细胞仪检测CD34和bcl-2蛋白表达，并观察造血细胞和造血基质的生长态势。 结果 CFU-GM的形态和产率、CD34 + 细胞的bcl-2蛋白表达反义组均与空白对照组相近，造血细胞和造血基质的生长态势良好。 结论 在正常骨髓体外培养条件下，bcl-2ASODN不影响骨髓细胞的造血功能，可能用于白血病骨髓的体外净化。

    关键词: bcl-2;寡核糖，核酸类，反义;骨髓;造血干细胞

    当前，造血干细胞移植(包括骨髓移植、外周血干细胞移植及脐血干细胞移植)仍是治愈白血病的主要途径。供体的缺乏和严重的移植物抗宿主病(GVHD)很大程度上限制异基因造血干细胞移植的临床应用。自体造血干细胞移植虽然没有上述两种弊端，但移植物中有残留肿瘤细胞，而且这些残留的肿瘤细胞可能已在反复的化疗过程中产生抗药性，常引起移植后复发。研究发现，bcl-2蛋白在淋巴瘤、白血病等血液系统恶性肿瘤细胞中高表达;高表达bcl-2的肿瘤细胞能抵抗化疗药物诱导的细胞凋亡，是化疗后肿瘤细胞残留与耐药的原因之一 [1-2] 。因此，从基因水平阻断bcl-2的转录和表达，可能有利于自体造血干细胞移植物的体外净化。笔者所在的课题组曾报道bcl-2反义硫代磷酸寡核酸(ASODN)能显著抑制急性早幼粒细胞白血病细胞株(HL-60)和原代急性白血病细胞的生长 [3-5] 。笔者的研究旨在探讨bcl-2A-SODN对骨髓细胞造血功能的影响，评价其在骨髓体外净化中应用的安全性。

     1 材料与方法

    1.1 细胞及培养体系 正常人骨髓来自福建医科大学附属协和医院门诊志愿者，知情同意后进入本研究。由髂后上棘抽取骨髓，肝素钠(万邦生化医药股份有限公司)抗凝(20U/mL髓血)，与IMDM培养液(华美生物工程公司)等倍稀释，用淋巴细胞分离液(相对密度1.077，华美生物工程公司)分离单个核细胞，经IMDM培养液洗涤2次，培养于含10%胎牛血清(FCS，杭州四季青生物工程材料有限公司)的IMDM培养液，置饱和湿度、体积分数为0.05的CO 2 培养箱中37℃培养 ......