高效液相色谱法测定乌梅中柠檬酸的含量
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魏屹，陈慧泼，刘昭莲，覃婕媛，蒋树杨
高效液相色谱法；乌梅；柠檬酸,,高效液相色谱法；乌梅；柠檬酸,仪器与试剂,2方法与结果,3讨论,【参考文献】
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高效液相色谱法测定乌梅中柠檬酸的含量 (pdf)
【摘要】 目的 采用高效液相色谱法测定中药乌梅中柠檬酸的含量。方法 选用Hypersil ODS柱(4.6mm×200mm，5μm)，流动相为0.025mol/L Na2HPO4溶液(pH=2.5)，流速为0.7ml/min，柱温为25℃，检测波长为214nm，外标法定量。结果 柠檬酸线性范围为3.0～9.0μg，r=0.9998，平均回收率为99.86%(RSD=2.0)。结论 该方法简便、准确、稳定、可靠，可用于乌梅的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱法；乌梅；柠檬酸
Determination of citric acid content in fructus mume by HPLC
WEI Yi，CHEN Hui-po，LIU Zhao-lian，et al.School of Pharmacy，Southwest Jiaotong University，Emei，Sichuan，614202，China
【Abstract】 Objective To determine the content of citric acid content in Fructus Mume by HPLC.Methods A Hypersil ODS column(4.6mm×200mm，5μm) was used as stationary phase and 0.025mol/L Na2HPO4(pH=2.5) was used as mobil phase with 214nm for detection wavelength.The flow rate was 0.7ml/min and the column temperature was 25℃.The quantitative analysis used external standard method.Results The linear range of citric acid was 3.0～9.0μg(r=0.9998).The average recovery was 99.86%(RSD=2.0).Conclusion The method is simple，accurate，stable and reproducible，and can be applied to quality control of Fructus Mume.
【Key words】 HPLC;fructus mume;citric acid
乌梅(Fructus Mume)为蔷薇科植物梅Prunus mume(Sieb.)Sibe.Et Zucc.的干燥近成熟果实，酸、涩，平，归肝、脾、肺、大肠经，具有敛肺，涩肠，生津，安蛔之功效[1]。用于肺虚久咳，久痢滑肠，虚热消渴，蛔厥呕吐腹痛，胆道蛔虫等症。果实含有机酸(如柠檬酸、苹果酸、琥珀酸等)，萜类，甾醇，氨基酸，糖类，挥发性成分，黄酮类，生物碱，微量元素(Fe、Mg、Cu等)[2]。《中国药典》2005年版采用电位滴定法测定乌梅中总有机酸的含量，本文采用HPLC法测定乌梅中柠檬酸的含量，为中药乌梅及含乌梅的中药制剂的含量测定提供依据。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪：Waters 515泵、Waters 2487双波长检测器，Empower 2色谱工作站，DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱，BS224S型万分之一电子天平，回流装置等。
1.2 药品与试剂 柠檬酸(AR，含一分子结晶水)；乌梅：产地峨眉，经本院中药鉴定教研室宋良科副教授鉴定，符合中国药典要求；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为Hypersil ODS柱(200mm×4.6mm，5μm)；柱温为25℃；流动相为0.025mol/L Na2HPO4溶液(pH=2.5)；流速0.7ml/min；检测波长214nm；进样量20μl。
2.2 溶液的配制
2.2.1 柠檬酸对照品溶液的配制 精密称取柠檬酸(AR)适量，加水溶解，制成0.5mg/ml的柠檬酸对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 分别取乌梅粗粉约4g，精密称定，置锥形瓶中，精密加水100ml，称定重量，加热回流4h，放冷，补足重量，滤过，收集续滤液。精密量取续滤液1ml于25ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
2.3 标准曲线 分别精密量取0.5mg/ml柠檬酸对照品溶液3ml、4ml、5ml、6ml、7ml、8ml、9ml于10ml容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，即得7个不同浓度的对照品溶液。分别进样各20μl，测定峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果，柠檬酸在3～9μg范围内线性关系良好，回归方程为：Y=4376.107+1824436X，r=0.9998。
2.4 精密度试验 精密量取0.5mg/ml柠檬酸对照品溶液6.0ml，加水定容至10ml，连续进样5次(进样量20μl)，结果见表1、图1，其峰面积的RSD=0.1%(n=5)。表1 精密度试验结果图1 柠檬酸对照品HPLC图(略)
2.5 供试品溶液的测定 取乌梅药材约4g，精密称定，按2.2.2法制备，分别测定其柠檬酸含量。结果见表2、图2，RSD=1.36%(n=6)。表2 乌梅中柠檬酸含量测定结果 图2 乌梅HPLC图(略)
2.6 稳定性试验 精密吸取按2.2.2制备的供试品溶液20μl，每隔2h进样2次，测定其峰面积，取其平均值，结果样品峰面积在10h内稳定；RSD%=0.25%(n=6)。
2.7 回收率试验 取已知含量的乌梅药材各2g ......
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