人骨髓间质干细胞体外扩增、冻存及初步鉴定
骨髓细胞；,间质干细胞；,低温保存；,组织工程；,细胞,培养的,,骨髓细胞；,间质干细胞；,低温保存；,组织工程；,细胞，培养的,1材料与方法,2结果,3讨论,参考文献：
摘要: 目的 探索人骨髓间质干细胞(hMSC)的体外分离、扩增、冻存、复苏的方法。 方法 无菌条件下抽取骨外伤髓内钉固定手术髓腔内容物，应用FicollPaque分离液分离hMSC，通过传代扩增细胞，“慢冻速融”进行细胞冻存、复苏；流式细胞仪检测hMSC的表面标志。 结果 hMSC容易分离获取、体外扩增迅速、冻存复苏简便，复苏后细胞形态保持不变。流式细胞仪检测结果显示，CD34、CD45阴性，CD29及CD71、CD90阳性表达率分别为96.9%，99.1%及4.1%。 结论 hMSC库有望建立，为组织工程、细胞移植的研究提供种子细胞。关键词: 骨髓细胞； 间质干细胞； 低温保存； 组织工程； 细胞，培养的
骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是骨髓细胞中除造血干细胞之外的细胞，近来研究发现其具有多向分化潜能，它的这种多向分化功能又有人称其为“横向分化”，虽有少数学者对此“横向分化”功能有质疑，但占绝对多数的研究均证实了“横向分化”功能的存在[13]，有望用于组织工程和细胞治疗、促进损伤机体的功能恢复[45]。稳定、高效的人骨髓间质干细胞(hMSC)体外扩增、保存方法是实验研究及应用的基础。笔者就hMSC体外扩增冻存进行研究，报道如下。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器 αMEM培养基、胎牛血清(FBS，美国HyClone公司)。FicollPaque分离液(美国Pharmacia公司)。荧光标记鼠抗人抗体CD34ECD、CD45PE、CD29FITC、CD90FITC、CD71FITC(美国Pharmingen公司)。倒置相差显微镜(CK4032PH，日本Olympus公司)。AIR TECH无菌操作台(BCM1000A，苏州苏净集团安泰公司)。低速自动平衡离心机(LDZ52，北京天诚公司)。水套式CO2孵育箱(Thermo Forma 311，美国Thermo Forma公司)。流式细胞仪(Beckman counter Epics XL，美国BD公司) ......
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