抗原_CD40;_重组融合蛋白质类;_基因表达;

CD40IgG1Fc融合蛋白真核表达载体的构建及表达

http://www.100md.com 《福建医科大学学报》 2007年第2期

抗原,CD40;,重组融合蛋白质类;,基因表达;,克隆,分子,,抗原,CD40;,重组融合蛋白质类;,基因表达;,克隆,分子,1材料和方法,2结果,3讨论,参考文献：

     摘要: 目的构建人CD40IgG1Fc融合蛋白的真核表达载体CD40IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)表达。方法应用TA克隆技术和亚克隆技术,构建人CD40膜外段和IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD40IgG1Fc/pcDNA3.1(+),将其转染入CHO细胞株并筛选,进行稳定表达。通过RTPCR、Western blot法及ELISA法证实融合基因的表达。结果成功构建真核表达载体CD40IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并建立CHO细胞稳定表达株。Western blot及ELISA法检测到细胞培养上清中有融合蛋白的表达。结论通过基因工程生产的人CD40IgG1Fc融合蛋白,能够特异性阻断CD40CD40L的相互作用。

    关键词: 抗原,CD40; 重组融合蛋白质类; 基因表达; 克隆,分子

    自身免疫性疾病多是针对自身抗原产生的免疫功能亢进,患者血液中可检测到高效价自身抗体和/或与自身成分起反应的致敏淋巴细胞。这些自身免疫应答的产物(包括自身抗体、自身致敏淋巴细胞等)作用于靶抗原所在组织、细胞，造成相应组织器官的病理性损伤和功能障碍。免疫功能的激活需要2个信号:一是具有识别特异性的抗原信号,二是共刺激分子的协同信号。CD40及其配体(CD40 ligand,CD40L,CD154)是体内特异性免疫反应系统中重要的一对共刺激分子,参与机体的体液免疫和细胞免疫。在生理状态下,CD40CD40L信号参与和维持许多重要的生理功能,但异常增高的CD40CD40L信号可导致机体免疫功能的紊乱而产生病理反应,在产生病理改变和功能障碍时形成自身免疫性疾病[1]。另外,CD40CD40L信号在间质纤维化、移植排斥反应、动脉粥样硬化及某些炎症反应(如感染性休克、再灌注损伤)等疾病的发生发展中同样起重要作用[23]。动物实验和I期临床研究表明,CD40CD40L信号的阻断剂可明显缓解上述疾病症状并调控疾病进程[4]。笔者通过构建CD40IgG1Fc融合蛋白真核表达载体,并转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞),建立CHO稳定表达株,分离纯化CD40IgG1Fc融合蛋白,为利用CD40IgG1Fc定向阻断CD40CD40L相互作用的实验研究及临床应用奠定基础。

     1 材料和方法

    1.1 材料葡聚糖泛影葡胺分层液(中国医学科学院血液学研究所)。胰酶,RPMI 1640,Trizol试剂及LipofectamineTM2000(美国GibcoBRL公司) ......

百拇医药网 http://www.100md.com/html/DirDu/2007/04/28/42/92/69.htm

您现在查看是摘要页，全文长 10253 字符。