白细胞介素2_苯乙烯二乙烯基苯

聚合物基质高效液相色谱填料在白细胞介素2分离中的应用

http://www.100md.com 《分析化学》医学期刊 2007年第4期

白细胞介素2,苯乙烯二乙烯基苯,反相高效液相色谱,麦科菲反相色谱柱,,白细胞介素2，苯乙烯二乙烯基苯，反相高效液相色谱，麦科菲反相色谱柱,1引言,2实验部分,3结果与讨论,References

     摘要聚合物型苯乙烯二乙烯基苯(PSDVB)微球装填的麦科菲反相高效液相色谱柱(MKFRPHPLC)，用于白细胞介素2(IL2)分离的最佳色谱条件：流动相A：0.1%三氟乙酸，流动相B：80%乙腈+0.1%三氟乙酸。B液在30 min内从0%线性增大至100%，流速1.0 mL/min；检测波长：280 nm。在该色谱条件下进行系统性实验，结果表明：MKFRP色谱柱分离IL2的柱效、分离度、重复性和拖尾因子均能达到药典要求，且柱效和分离度与SOURCE色谱柱相当；MKFRP色谱柱的pH适用范围为1～14；柱压与SOURCE色谱柱相当，且低于Hypersil C8色谱柱和Polaris C18色谱柱的柱压，可在更高流速下操作；MKFRP色谱柱的非极性与SOURCE色谱柱相当；MKFRP色谱柱的超载性能优于SOURCE色谱柱，其对IL2进样液的最大载样量为300 μg。

    关键词白细胞介素2，苯乙烯二乙烯基苯，反相高效液相色谱，麦科菲反相色谱柱

     1 引言

    白细胞介素2(IL2)参与正常细胞和癌细胞的生长、免疫细胞识别及炎症等的生理和病理状态的调控[1]，是近年来最受重视的淋巴因子之一。在临床上的应用研究结果表明：IL2具有广谱免疫增强作用，能增强细胞毒性T细胞(TC)的杀伤效应，直接激活B细胞，提高T细胞淋巴瘤活性[2]。近几年，已有大量文献作了有关IL2分离纯化方面的报道[3]，IL2的分离纯化包括多步过程，但最后一步使用最多的是采用反相高效液相色谱手段将IL2纯化到均一状态 [1]。由于目前商品化的色谱填料大部分为硅胶基质的填料，较多文献的中IL2的分离纯化均利用硅胶基质键合不同长度烷基链的色谱填料进行IL2的反相高效液相色谱分离分析[3,4]，流动相多为含有0.1%三氟乙酸的水和乙腈，这种分离条件有其本身固有的缺点：一方面流动相pH值较低对硅胶基质的色谱柱使用寿命影响较大；另一方面硅胶填料表面进行了烷基化，IL2与烷基链之间会产生较强的作用力，使IL2较难被洗脱下来 [4]。根据文献报道，粒径单分散的苯乙烯二乙烯基苯共聚物(PSDVB)微米级微球已被应用于蛋白药物的反相色谱分离[5，6]。这种色谱填料适用的pH变化范围宽(pH1～14)，在强酸、强碱、水和有机溶剂条件下，填料的机械和化学性能稳定。与硅胶填料不同，PSDVB 微球的表面为苯基，IL2与苯基的非极性作用要小于IL2与烷基链的非极性作用，避免了使用较高浓度的有机溶剂来洗脱样品。本研究采用IL2进样液在MKFRP聚合物型(PSDVB)色谱柱上进行了分离条件的优化 ......

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