基质金属蛋白酶-2在mRNA水平表达与乳腺癌转移关系及临床病理相关性的研究
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武云飞，姜 颖，肖 岷，庄永志
乳腺癌；基质金属蛋白酶2；转移；RT-PCR,,],乳腺癌；基质金属蛋白酶2；转移；RT-PCR,1资料与方法,2结果,3讨论,[参考文献]
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基质金属蛋白酶-2在mRNA水平表达与乳腺癌转移关系及临床病理相关性的研究 (pdf)
[摘要] 目的 探讨乳腺癌MMP-2 mRNA表达量与乳腺癌转移的关系及临床意义。方法 采用荧光定量RT-PCR方法，分析32例乳腺原发癌和与其配对淋巴结转移癌的MMP-2 mRNA表达量，分析86例临床乳腺癌标本的MMP-2 mRNA表达与临床病理类型、临床分期、雌孕激素受体及Her-2表达的关系。结果 32例乳腺转移癌MMP-2 mRNA表达量低于原发癌(P<0.05)；肿瘤≤2 cm的MMP-2 mRNA表达量高于肿瘤>2 cm的表达量(P<0.05);组织分级为Ⅱ级、Ⅲ级的MMP-2 mRNA表达量低于Ⅰ级(P<0.05);淋巴结4个以上阳性组MMP-2 mRNA表达量低于淋巴结1～3个阴性组(P<0.05)；MMP-2 mRNA表达量经过统计学分析与临床分期、病理类型、雌孕激素受体及Her-2表达无关。结论 MMP-2在mRNA转录水平的表达存在负反馈调节。MMP-2 mRNA转录水平的表达与乳腺癌转移有关，MMP-2在转录水平的表达在肿瘤较小时上调，随着肿瘤的增大其转录水平表达下调，随着肿瘤恶性程度的增加，其转录水平的表达量在下降，在肿瘤发生的早期表达上调，随着肿瘤的进展表达量下调。
[关键词] 乳腺癌；基质金属蛋白酶2；转移；RT-PCR
Clinical and pathologic significance and relationship between expression of matrixmetalloproteinase 2 mRNA and breast cancer metastasis
WU Yun-fei,JIANG Ying,XIAO Min,et al.
Daqing Oilfield General Hospital,Daqing 163001,China
[Abstract] Objective To discuss the clinical and pathology significance of matrix metalloproteinase 2,MMP-2 mRNA and the relationship between MMP-2 mRNA expression and breast cancer metastasis.Methods Detect MMP-2 mRNA expression of 32 breast cancer, metastatic lymphnode and 86 clinical breast cancer samples by fluorence-quantitative RT-PCR and analyse the relativity between MMP-2 mRNA expression and clinical,pathology factors,the status of ER/PR and Her-2.Results MMP-2 mRNA expression in 32 metastatic lymph node is lower than in primary breast cancer(P<0.05).The mRNA expression of MMP-2 in tumor 2 cm is lower than in tumor≤2 cm(P<0.05).The MMP-2 mRNA expression in stage Ⅱ,Ⅲ is lower than in stage Ⅰ(P<0.05).The mRNA expression of MMP-2 in more than 4 lymphnodes positive is lower than in lymphnode 1-3 positive (P<0.05).The MMP-2 mRNA expression is irrelated with tissue grade,pathologic type,ER,PR and Her-2.Conclusion MMP-2 mRNA expression is upregulated in early clinical stage,lymph node metastatic early stage,and down regulated with tumor progressing.MMP-2 mRNA expression is related with the metastasis of breast cancer.
[Key words] breast cancer;matrix metalloproteinase 2;metastasis;RT-PCR
肿瘤的转移是一个极其复杂的过程，这一过程包括肿瘤细胞从原发灶脱离，穿越基膜及细胞外基质浸润迁移并进入血管，黏附于血管内皮，进入循环系统并随血流到达远处，穿出血管侵入细胞外基质并形成转移灶。癌细胞脱离原发灶后，穿越组织屏障是转移的关键步骤。细胞外基质(ECM)和基膜(BM)是肿瘤生长和扩散的自然屏障，基质金属蛋白酶9(MMP-9)是肿瘤细胞产生或诱导产生的蛋白酶类，几乎可以降解BM和ECM中的所有成分，协助肿瘤细胞转移。本研究中我院采用荧光定量RT-PCR方法检测了86例乳腺原发癌和32例配对转移癌中的MMP-2 mRNA定量表达，对MMP-2在mRNA水平的表达与乳腺癌转移及临床病理因素的相关性进行探讨。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集我院86例2003年6月～2005年6月进行乳腺癌根治术的病例，术中立即取材，分别取原发癌和淋巴结转移癌，所有淋巴结转移癌均经过病理组织学评价，选取癌细胞在75%以上的淋巴结。患者年龄28～76岁，平均48岁。原发癌86例，其中配对淋巴结转移癌32例；Ⅰ期7例，Ⅱ期55例，Ⅲ期24例；淋巴结阳性53例，淋巴结阴性33例；单纯癌6例，浸润性导管癌69例，髓样癌7例，浸润性小叶癌2例，腺癌2例；病理组织学分级Ⅰ级27例，Ⅱ级46例，Ⅲ级13例。对瘤组织进行ER、PR免疫组化检测，阳性判定标准为阳性细胞数达30%以上；采用免疫组化方法检测Her-2受体，阳性数达10%以上为阳性。组织标本冻存于-80 ℃冰箱中。标本收集过程中采用DEPC处理过的Epindoff管分装，注意避免RNA酶污染。
1.2 方法
1.2.1 RNA的提取 采用Trizol试剂提取组织标本RNA，核酸分析仪测定浓度并进行琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量。
1.2.2 MMP-2引物与Tagman探针的设计与合成 引物设计采用Oligo 6.0软件设计，管家基因采用GAPDH。每一条引物与探针序列均与Blast进行同源性比较，引物与探针由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。
MMP-2引物与探针：
Forward 5’-CGC TCA GAT CCG TGG TGA GAT-3’ ......
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