摘要: 目的 获得Ⅰ型黏附素代表菌株———泌尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)J96PapG全基因扩增片段并进行克隆子分析。 方法 设计合成一对可扩增Ⅰ型papG全长基因的PCR引物，采用长片段PCR扩增法获得该基因的扩增片段，以限制性内切酶酶解后克隆pUC18质粒载体。 结果 限制性酶谱、PCR和序列分析表明，所获得重组质粒pJG29中已带有Ⅰ型papG全长基因片段的克隆。 结论 所设计合成的引物和建立的PCR扩增法可用于大量获取并分析UPECⅠ型黏附素基因。

    关键词: 大肠杆菌;细菌黏附;基因

    泌尿道感染是临床常见病和多发病，这种感染可以局限于下尿道成为膀胱炎或尿道炎，也可上行累及肾盂引起急性肾盂肾炎，大肠埃希菌是泌尿道感染的主要病原菌。流行病学研究资料表明，85%以上可引起泌尿系感染的大肠埃希菌表面均有P菌毛，因此称为泌尿道致病性大肠埃希菌(Uropathogenic E.coli，UPEC) [1] 。近年对泌尿系感染机制的研究提示，UPEC对泌尿道黏膜上皮细胞的黏附是由位于P菌毛尖端的一种菌毛亚单位蛋白成分———PapG介导 [2] 。PapG为UPEC的黏附素，是细菌黏附定植的主要决定因子。笔者通过长模板PCR扩增和基因克隆获得UPECⅠ型PapG黏附素全长基因并对该基因片段进行克隆分析。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 质粒、菌株及培养基 pUC18载体质粒及寄主菌E.coli DH5α为福建医科大学分子流行病学研究室保存。UPEC J96为具有Ⅰ型黏附素P菌毛泌尿道感染大肠埃希菌株 [3] ，E.coli P678-54为无菌毛的大肠杆菌。细菌培养采用LB液体和固体培养基。抗生素抗性选择培养基为在LB液体或固体中加入相应的抗生素制成。所使用的氨苄青霉素(Ap)的工作浓度为100μg/mL。

    1.1.2 主要生化试剂和工具酶 长片段PCR扩增系统和IPTG、x-gal(Roche Molecular Biochemicals公司) ......