摘要: 目的 探讨正义单链寡脱氧核糖核苷酸(ssPTODN)抑制胰岛素对人α1(I)型胶原(COL1A1)基因启动子的激活。 方法 (1)将含有氯霉素乙酰基转移酶(CAT)基因与人COL1A1基因-2483～+42bp片段的重组质粒(pCOLH 1 2.5)稳定转染至NIH3T3细胞，加入不同剂量的胰岛素，测CAT值;(2)合成全硫代的ssPTODN，其序列为COL1A1基因-129～-105的25个碱基。稳定转染的细胞克隆内加入不同剂量的ssPTODN共孵育24h，加入2.5μmol/mL的胰岛素，测定CAT值。 结果 (1)胰岛素浓度(μmol/mL)在0，0.25，2.5，10时的CAT值(pg/mL)分别是920±94，1021±99，1595±81，1711±121。2.5μmol/mL及10μmol/mL的胰岛素显著增加了COL1A1基因启动子活性(P<0.05);二者的作用差异无显著性(P>0.05)。(2)胰岛素剂量为2.5μmol/mL，ssPTODN浓度(μg/mL)分别为0，20，40，80时，各组的CAT值(pg/mL)相应为1660±104，1625±64，1396±76，1040±135;ssPTODN浓度为80μg/mL时，受胰岛素刺激所增加的CAT值得到显著抑制(P<0.05)，回复到基础水平附近。 结论 ssPTODN能够抑制胰岛素对人COL1A1基因启动子的激活。

    关键词: 寡脱氧核糖核苷酸;胰岛素;胶原;启动区(遗传学);转录

    Ⅰ型胶原(COL1)的过度合成与器官纤维化密切相关，有关COL1基因的转录调控研究已取得了很多进展。实验证明胰岛素能刺激肝星形细胞有丝分裂，增强COL1基因启动子活性，促进转录 [1] 。本研究尝试合成与启动子序列相同的正义单链硫代寡脱氧核糖核苷酸(ssPTODN)，以竞争抑制胰岛素对人α1(I)胶原(COL1A1)基因启动子的激活，取得较好效果。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂 NIH3T3细胞系购自中科院上海细胞所;含氯霉素乙酰基转移酶(CAT)基因与人COL1A1基因-2483～+42bp片段的重组质粒(pCOLH 1 2.5)由第二军医大学长征医院实验科惠赠 [1] ;PCl-neo质粒、pCAT3-Enhancer质粒、An-tibiotic G418Sulfate购自Promega公司;RPMI1640培养基及小牛血清购自Gibco BRL公司;转染试剂盒(infectine2000)购自Invitrogen公司;CAT-ELISA检测试剂盒购自Roche公司;重组人胰岛素购自Upstate公司 ......