摘要: 目的 观察新西兰兔角膜缘干细胞移植后供体干细胞数量的变化与角膜上皮化的关系，为角膜缘干细胞移植手术效果提供理论依据。 方法 新西兰兔30只，分为自体移植和异体移植两组，建立角膜缘干细胞缺损动物模型，分别进行自体和异体角膜缘干细胞移植。术后1周、1月、3月空气栓塞各处死5只，取包括角膜缘的角膜标本，免疫组织化学p63蛋白抗体检测供体干细胞的存活数量和增殖分化状况，比较两组的移植效果。 结果 自体移植术后1周，供体干细胞仍然局限于受体角膜缘;1个月后，上皮细胞覆盖角膜全层，但是层次非常少;3个月后，干细胞的储备数量基本上恢复到正常水平，角膜完全上皮化。异体移植1周，干细胞的数量有一定的减少;1个月后，角膜缘干细胞储备数量明显减少;3个月后，角膜缘已经检测不到干细胞。 结论 干细胞的储备数量和增殖分化状况直接影响到角膜上皮化的结局;有效的干细胞检测结果可以为临床角膜缘干细胞移植效果提供依据，p63蛋白抗体可以作为一个检测角膜缘干细胞的特异指标。

    关键词: 角膜缘移植;造血干细胞移植;p63;免疫组织化学;兔

    角膜缘干细胞移植经历十几年的临床应用后，已被证明是治疗干细胞损耗的有效方法。然而直到现在，移植后供体干细胞的去向和结局仍无定论，毫无疑问，有效的术后检测手段是解决这一问题的根本途径。笔者拟通过免疫组织化学方法，半定量检测供体干细胞在受体的存活数量和增殖分化状况，为角膜缘干细胞移植手术的效果提供理论依据。

    1 材料和方法

    1.1 动物 新西兰白兔购自上海申旺实验动物养殖场[许可证号:SCXK(沪)2002-0011]。

    1.2 主要试剂 鼠抗人p63单克隆抗体(Santa Cruz)，SP试剂盒(通用型)，购自北京中衫金桥生物有限公司。1.3 方法

    1.3.1 动物分组 将30只健康、平均体质量约2kg的新西兰白兔(雌雄错配，眼部均无任何疾患)随机均分为两组，即自体移植组和同种异体移植组。

    1.3.2 动物模型 (1)自体移植组:将左眼作为供眼，右眼作受眼。10%戊巴比妥钠(30mg/kg)耳缘静脉缓慢推注全身麻醉，1%的卡因表面麻醉。内外眦部分剪开，1-0丝线牵拉上下眼睑和第三眼睑充分暴露眼球 ......