摘要: 目的 测定八棱丝瓜蛋白2(LF-2)对小鼠黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用。 方法 以MTT法测定LF-2对B16细胞的增殖抑制作用，以形态学、黑色素含量及细胞周期变化为指标，观察LF-2诱导B16细胞分化的作用。 结果 LF-2对B16细胞具有明显的增殖抑制作用，并使B16细胞停滞于G 1 期;细胞生长缓慢，平铺不重叠，甚至形成网状结构，呈正常上皮样细胞分化，细胞质内细胞器丰富，黑色素小体明显增多;黑色素含量显著增加。 结论 LF-2对B16细胞具有明显的诱导分化作用。

    关键词: 八棱丝瓜蛋白;黑色素瘤;细胞分化核糖体

    失活蛋白(RIP)广泛存在于高等植物中 [1] ，迄今分离到的植物RIP约80余种。植物RIP通常按结构不同分为两型:Ⅰ型RIP为单链蛋白，如天花粉蛋白，在植物RIP中占多数;Ⅱ型RIP是通过二硫键连接的双链蛋白，如蓖麻毒素。它们是一类RNA N-糖苷酶或多核苷酸∶腺苷糖苷酶 [2-3] ，具有抗生育、抗病毒和抗肿瘤等多种生物学活性 [4-6] 。植物RIP抗肿瘤方面的研究早就引起人们的兴趣，RIP对肿瘤细胞的杀伤作用远比对正常细胞的强 [7] ，尤其是与单克隆抗体交联成的免疫毒素对肿瘤细胞具有靶向性和高杀伤效应 [8] 。八棱丝瓜蛋白2(LF-2)是从八棱丝瓜(Luffa acutangula)种子中提取的新的Ⅰ型RIP，相对分子质量约28kD，为碱性单肽链糖蛋白 [9-10] 。通过对多种肿瘤细胞进行研究，发现LF-2除了具有抑制增殖和诱导凋亡的作用外，还具有明显的诱导分化作用。笔者研究LF-2对黑色素瘤细胞B16的分化诱导作用。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与设备 LF-2由本课题组制备，纯度约为95%，采用Lowrry法进行蛋白质定量。RPMI-1640培养基(美国GIBCO公司)。胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)。MTT(Sigma公司)。酶标仪(550型，美国BIO-RAD公司)。流式细胞仪(EPICS XL型，美国Coulter公司)。相差显微镜(F-2型，日本OLYMPUS公司)。

    透射电子显微镜(Hu-12A型，日本HITACHI公司)。分光光度计(752型，上海精科公司)。

    1.2 细胞株及培养条件 小鼠黑色素瘤细胞株B16购自中科院上海细胞生物学研究所，用含10%胎牛血清及800U/mL庆大霉素的RPMI-1640培养基培养，经0.25%胰酶消化传代，取对数生长期细胞用于实验。

    1.3 LF-2对细胞增殖的影响 ......