摘要: 目的 探讨黏附分子CD 44s 在体外培养人眼小梁细胞(HTC)的表达及其与小梁细胞结构和功能的关系。 方法 对体外培养的HTC应用流式细胞术和RT-PCR法检测CD 44s 的表达。 结果 HTC高表达CD 44s 黏附分子，阳性细胞数达92%以上，而且均表达CD 44s mRNA。 结论 体外培养的HTC表达CD 44s 黏附分子。CD 44s 与其配体透明质酸(HA)的协同性调节HTC的内环境并在维持其结构和功能方面起重要作用。

    关键词: 小梁网;细胞培养;抗原，CD 44 ;青光眼

    房水流出通道的阻力增加，从而导致眼内压升高是原发性开角型青光眼(POAG)的一个重要病理特征，而房水流出通道的病变部位目前公认位于小梁网。因此，对人眼小梁细胞(HTC)及其生物学特性的研究是青光眼领域研究的热点之一。随着分子生物学和免疫学的进展，在CD 44 生物学功能和化学本质认识的基础上，人们逐渐认识到CD 44 分子在维持HTC结构和功能方面可能起一定作用，并与POAG发病之间存在着某种联系。为此，本研究在体外培养HTC成功的基础上，应用RT-PCR和流式细胞术检测HTC是否表达CD 44s ，并探讨CD 44s 分子的表达与HTC生理功能之间的关系，从而进一步探讨与POAG发病之间的关系。

    1 材料和方法

    1.1 主要材料 DMEM/F12培养液(美国GBI-COL公司)，胎牛血清(杭州四季青生物公司)，鼠抗人层黏连蛋白单克隆抗体(福州迈新生物技术开发有限公司)，鼠抗人纤维黏连蛋白单克隆抗体及鼠抗人神经元特异性烯醇化酶单克隆抗体(北京中山生物技术有限公司)，异硫氰酸荧光素标记的鼠抗人CD 44s 单克隆抗体(奥地利Bender公司)，Trizol试剂盒(美国Promega公司)，超净工作台(美国Thermo Forma公司)，CO 2 培养箱(美国CELLSTAR公司)，流式细胞仪(美国Beckman公司)，PCR扩增仪(2400型，美国PE公司)

    1.2 方法

    1.2.1 HTC的体外培养及鉴定 HTC的体外培养同文献[1]。取2个捐赠的眼球，供体均为男性，年龄分别为28岁、37岁。无菌条件下沿角巩膜缘后3～5mm处环形剪开，去掉后节，前节倒置于无菌台上，解剖显微镜下把自制细铜丝插入Schlemm管，仔细分离小梁网，剪成2mm×1mm×1mm的小块，放入25mL培养瓶底，贴壁30min后，加入含20%胎牛血清的DMEM培养液，置CO 2 培养箱内 ......