胃癌单克隆抗体导向丝裂霉素C治疗的实验研究
作者：黎松 张学庸 陈希陶 张素胤 陈陵际 殳裕华 张家骝
单位：黎松 张学庸 陈希陶(西安，第四军医大学西京医院消化病研究室 710032)；张素胤 陈陵际 殳裕华 张家骝 中国科学院上海药物研究所
关键词：抗体，单克隆；丝裂霉素类；抗体-毒素轭合物；胃肿瘤
中华医学杂志900702
摘要 抗人胃癌单克隆抗体(MGb2)通过葡聚糖T-40作为中介体与丝裂霉素c(MMC)连结，制备免疫结合物，于每一抗体分子中引入20个分子MMC，抗体活性保存良好，结合物在体外对靶细胞显著较强的选择性杀伤作用。裸鼠体内注入免疫结合物对胃癌移植瘤的生长有明显的抑制作用，优于游离药物及药物与抗体混合物。
随着单克隆抗体制备技术的问世及新型交联剂的出现，肿瘤抗体导向治疗的研究越来越受到重视，此方法可以提高疗效，减轻毒副作用[1]。本组拟选择鼠抗入胃癌单克隆抗体(MGb2)[2]作为载体、葡聚糖T-40作为中介体制备抗体-MMC(丝裂霉素C)结合物，并检测其在体内外对胃癌细胞的杀伤作用。
, 百拇医药
材料和方法
一、材料
移植瘤肾包膜下接种裸小鼠10只，体内治疗试验裸小鼠27只随机分为6组，治疗组每组4只，对照组7只。
Swiss系裸小鼠及人胃癌移植瘤(SGC-7901)皮下型模型由上海中科院药物所提供。人胃癌细胞系(SGC-7901)由军事医学科学院提供，正常人胚肺细胞系(SL7)由上海市胸科医院提供，均培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中。
鼠抗人胃癌单克隆抗体(MGb2)(IgG1亚型)由本室制备，含MGb2单抗的BALB/c小鼠腹水经50%(NH4)2SO4盐析及二乙基胺基乙基纤维素离子交换层析得到纯化的IgG。
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二、方法
1. 免疫结合物的制备[3]：葡聚糖T-40 200mg与55mg高碘酸钠溶于40ml蒸镏水中室温下搅伴反应4小时，反应混合物对蒸镏水充分透析得到多醛基葡聚糖(PAD)。对PBS 30%聚乙二醇(分子量20000)0.02mol/L(pH7.4)反透析浓缩至浓度30mg/ml。60mgPAD与1.6mlMGb2(20mg)相混合，4°C反应24小时后于反应混合物中加入12mg MMC(溶于3mlPBS中)继续反应24小时，于其中加入0.3ml硼氢化钠PBS溶液(1mg/ml)2小时后反应混合物通过Sephadex G-200得到与胃癌细胞选择性作用的特异性结合物(MGb2-PAD-MMC)。结合物中MMC浓度根据其在363nm的克分子消光系数为23000计算，抗体浓度系采用改良的Lowry法测定，通过计算MMC和抗体两者克分子浓度的比值求得每一抗体分子中引入的MMC分子数目。
, http://www.100md.com 采用同一方法制备正常鼠IgG-PAD-MMC(无关抗体结合物)。
2. 结合物中抗体活性的检测：采用间接ELISA法检测。人胃癌细胞SGC-7901加至40孔培养液(2×104/孔)，二氧化碳培养箱中培养24小时后以0.25%戊二醛固定，于每孔加入0.1ml不同浓度结合物及游离抗体，37°C反应1小时后于每孔加入辣根过氧化物酶标记兔抗鼠Ig抗体，1小时后加底物显色，测定每孔495nm外光密度值。
3. 细胞毒性试验：以SGC-7901作为靶细胞、SL7作为非靶细胞，采用噻唑蓝活细胞染色法[4]检测特异性结合物对肿瘤靶细胞和非靶细胞的杀伤作用，并与游离MMC及无关抗体结合物比较。
4. 免疫结合物的放射性碘标记：MGb2-PAD-MMC结合物的放射性碘标记系采用氯胺T法，通过SephadexG-25除去游离125I，标记免疫结合物(125I-MGb2-PAD-MMC)的比活性为3.4μCi/μg蛋白，标记率为45%。采用同一方法对无关抗体结合物进行125I标记。
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5. 免疫显像及生物学分布研究：6只荷人胃癌SGC-7901(皮下型)Swiss裸小鼠分为两组，每组3只分别腹腔给予125I-MGb2-PAD-MMC及125I-正常鼠IgG-PAD-MMC(10μCi/只)，96小时后行ECT显像，之后活杀裸小鼠，取肿瘤、全血、心、肺、肝、脾、肾及胃等脏器，称重、测每分钟放射性计数值(cpm)，计算肿瘤、全血及各组织器官的放射性比度(cpm/mg)，求得肿瘤组织与非肿瘤组织放射性比度比值(T/NT)。
6. 移植瘤肾包膜下的接种及其生长曲线的确定：参照文献[5，6]方法分别将一块瘤组织(1～2mm3)接种在10只裸小鼠两侧肾包膜下，于第2、4、8、9、10天各处死2只小鼠，测量瘤径大小，计算瘤径净增值。
7. 体内治疗试验(双侧肾包膜下法)：在瘤组织接种后6小时于各治疗组裸鼠腹腔分别注射下述药物：(1)MGb2-PAD-MMC，其中MMC为1mg/kg、MGb210mg/kg；(2)MMClmg/kg；(3)MGb2-MMC，10mg/kg+1mg/kg；(4)MGb210mg/kg；(5)正常鼠IgG-PAD-MMC，其中MMC用量为1mg/kg；(6)对照组：生理盐水0.2ml只。每日给药1次，持续6天。瘤组织接种后第8天活杀裸小鼠，取出肾脏测量最终肿瘤组织块大小，通过治疗前后瘤径大小的变化判断待测物质体内抗肿瘤作用。
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结 果
一、结合物制备及抗体活性检测结果
通过葡聚糖中介体将MMC与MGb2相交联，每一抗体分子中可引入20个分子MMC。ELISA检测结果表明，在结合物制备过程中抗体活性较好地得以保存，稀释至3nmol/L水平，仍能较好地与肿瘤靶细胞相结合，其活性与未修饰抗体相接近。
二、免疫结合物的细胞毒性作用
MGb2-PAD-MMC、MMC及正常鼠IgG-PAD-MMC对靶细胞及非靶细胞的48小时杀伤作用如图1所示，可以看出，MGb2-PAD-MMC对肿瘤靶细胞的杀伤作用与游离MMC相近(P〉0.05)，但显著优于正常鼠IgG-PAD-MMC(P〈0.05)；与游离MMC相比较，MGb2-PAD-MMC对非靶细胞作用很弱，其作用与正常鼠IgG-PAD-MMC相近(P〉0.05)。
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(浓度μg/ml)
图1 ▲代表MGb2-PAD-MMC，Δ代表MMC，×代表正常鼠IgG-PAD-MMC A：人胃癌细胞系SGC-7901，B：正常人胚肺细胞系(SL7)
三、免疫结合物在荷人胃癌裸鼠体内肿瘤组织定位作用
免疫结合物被肿瘤组织选择性摄取，肿瘤组织比放射性强度明显高于非肿瘤组织，优于无关抗体结合物(表1)。ECT显像结果与生物学分布结果相一致，给予125I-MGb2-PAD-MMC后，肿瘤组织可以被清晰地显示出来，而125I-正常鼠IgG-APD-MMC显示阴性结果(图2a，2b)。
表1 125I-MGb2-PAD-MMC及125I-正常鼠IgG-PAD-MMC
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在荷人胃癌移植物SGC-7901裸鼠体内生物学分布(
±S) 组织
T/NT
MGb2-PAD-MMC
正常鼠IgG-PAD-MMC
血
0.79±0.03
0.19±0.013Δ
心
2.63±0.72
0.83±0.240*
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肺
1.65±0.14
0.34±0.100*
肝
3.46±0.58
1.02±0.270*
腺
3.46±0.71
0.93±0.210*
肾
4.11±0.88
0.86±0.190*
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胃
5.50±1.38
1.31±0.320*
* P〈0.05 ΔP〈0.01
图2a 正常鼠给予125I-MGb2-PAD-MMC显示阴性结果
图2b 裸鼠给予125I-MGb2-PAD-MMC后肿瘤组织显示出来
四、移植瘤SGC-7901生长曲线
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瘤组织在两侧肾包膜下生长速度相近，在接种后第8天瘤径增长值为接种时瘤径的3～4倍(图3)。对接种后第10天瘤组织行组织学检查未见炎性细胞浸润、水肿、坏死等现象(图4)。根据SGC-7901的生长特点，确定了第8天为治疗试验后小鼠解剖时间。
图3 SGC-7901移植瘤生长曲线
图4 接种于裸小鼠肾包膜下人胃癌移植SGC-7901第10天的组织学形态 HE×600
五、免疫结合物对胃癌SGC-7901移植瘤体内生长的抑制作用
MGb2-PAD-MMC、MMC及MGb2+MMC混合物对肿瘤组织有显著抑制作用，其中以MGb2-PAD-MMC疗效最佳，优于MMC及MGb2+MMC混合物，单纯将MGb2与MMC混合无抗肿瘤的协同作用(表2)。
, 百拇医药
表2 胃癌单抗MGb2-PAD-MMC结合物对胃癌移植瘤SGC-7901生长抑制作用(±S) 组别
肾个数
平均瘤径(omu)
治疗前后移植瘤
瘤径改变(omu)
抑制率
(%)
治疗前
治疗后
(1)MGb2-PAD-MMC
, 百拇医药
8
12.3±1.6
23.1±5.8
10.9±4.7
68.67*Δ
(2)MMC
8
11.9±1.2
31.1±3.6
18.9±3.4
45.73*
(3)MGb+MMC
, 百拇医药
8
13.0±1.1
29.9±1.8
16.9±1.8
51.60*
(4)MGb2
8
12.6±0.6
39.9±2.9
27.3±2.4
21.30
(5)正常鼠IgG-PAD-MMC
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8
11.0±0.9
37.9±3.8
26.9±4.3
22.45
(6)对照组
14
11.8±1.0
46.6±8.4
34.7±8.1
—
注：omu体视测量单位 *与对照组比较P〈0.01 Δ与(3)比较P〈0.01讨 论
, 百拇医药
丝裂霉素C为抗生素类抗癌药物，广泛用于慢性白血病及胃癌、结肠癌等实体瘤的治疗。然而，由于毒性作用于，其临床应用受到限制克服这一不足的可行措施是将其与抗肿瘤单克隆抗体相交联对肿瘤组织选择性发挥其毒性作用。我们曾选择活性酯法制备鼠抗人胃癌单克隆抗体MGb2-MMC结合物，每个抗体分子中可引入4～5个分子MMC，得到的免疫结合物对肿瘤靶细胞显蒜选择性杀伤作用。为提高每个抗体分子中引入的药物分子数目且保持抗体活性，我们选择葡聚T-40作为中介体制备抗体-药物结合物，采用本方法，每个抗体分子中引入的药物分子数目增加至20个且抗体活性保存良好，结合物对肿瘤靶细胞也显示较强的选择性杀伤作用。免疫显像及生物学分布研究结果表明，抗体通过葡聚糖中介体与药物连结后，其体骨肿瘤组织定位能力无明显改变。
免疫结合物体内抗肿瘤活性的检测是十分重要的，并非体外有效的免疫结合物都能显示一定的体内治疗作用。有报道采用肿瘤皮下或腹水型模型来评价结合物体内抗肿瘤作用[7]。我们选择肾包膜下法测定MGb2-PAD-MMC体内对SGC-7901肿瘤移植物生长的抑制作用，由于肾包膜血运丰富，肿瘤移植物生长相对较快且待检物质较易到达肿瘤组织，缩短了试验所需时间。我们将瘤组织接种在裸小鼠双侧肾包膜下以评价结合物疗效。与单侧肾包膜下法相比较，双侧肾包膜下接种方法在技术上复杂些，但其优点是可在同一个体中获得两个样本数据，节省用鼠数。张素胤等[6]曾将多种人癌移植瘤单侧肾包膜下和双侧肾包膜下接种体内增长速度作一比较，未见明显差异。我们体内治疗试验结果表明，单独应用MMC对肿瘤生长有一定抑制作用，但如将MMC与抗肿瘤的单克隆抗体连接后其作用显著增强，如果延长给药间歇、减少给药次数，则结合物与游离药物体内疗效的差别可望增大，目前我们正深入进行这方面的研究。
, 百拇医药
参考文献
1. Baldwin RW Monoclonal antibody targeting of anti-cancer agents. Eur J Cancer Clin Oncol 1985；21：1231.
2. Fan DM, et al. Mouse and human monoclonal antibodies against gastric cancer: Preparation and clinical application. Chin Med J 1988；101：488.
3. Manabe Y, et al. Production of a monoclonal antibody-mitomycin C conjugate, utilizing dextran T-40, and its biological activity. Biochem Pharmacol 1985；34：289.
, 百拇医药
4. 黎 松，等.半乳糖结合位点封闭式免疫毒素的制备及其特性.中国药理学与毒理学杂志 1989；3：81.
5. Bogden AE, et al. A rapid screening method for testing chemotherapeutic agents against human xenografts. In: Houchens DP, et al. eds. Proceedings of the symposium on the use of athymic(nude)mice in cancer research.New York: Fisher，1978：231-256.
6. 张素胤，等.8种抗癌药物对裸小鼠包膜下接种的人肺腺癌移植瘤(LAX-83)生长的影响.中国药理学报 1989；10：450.
7. FitzGerald DT, et al. Antitumor activity of an immunotoxin in a nude mouse model of human ovarian cancer. Cancer Res 1987；47：1407.
(1989年11月6日收稿 1990年4月26日修回), 百拇医药
单位：黎松 张学庸 陈希陶(西安，第四军医大学西京医院消化病研究室 710032)；张素胤 陈陵际 殳裕华 张家骝 中国科学院上海药物研究所
关键词：抗体，单克隆；丝裂霉素类；抗体-毒素轭合物；胃肿瘤
中华医学杂志900702
摘要 抗人胃癌单克隆抗体(MGb2)通过葡聚糖T-40作为中介体与丝裂霉素c(MMC)连结，制备免疫结合物，于每一抗体分子中引入20个分子MMC，抗体活性保存良好，结合物在体外对靶细胞显著较强的选择性杀伤作用。裸鼠体内注入免疫结合物对胃癌移植瘤的生长有明显的抑制作用，优于游离药物及药物与抗体混合物。
随着单克隆抗体制备技术的问世及新型交联剂的出现，肿瘤抗体导向治疗的研究越来越受到重视，此方法可以提高疗效，减轻毒副作用[1]。本组拟选择鼠抗入胃癌单克隆抗体(MGb2)[2]作为载体、葡聚糖T-40作为中介体制备抗体-MMC(丝裂霉素C)结合物，并检测其在体内外对胃癌细胞的杀伤作用。
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材料和方法
一、材料
移植瘤肾包膜下接种裸小鼠10只，体内治疗试验裸小鼠27只随机分为6组，治疗组每组4只，对照组7只。
Swiss系裸小鼠及人胃癌移植瘤(SGC-7901)皮下型模型由上海中科院药物所提供。人胃癌细胞系(SGC-7901)由军事医学科学院提供，正常人胚肺细胞系(SL7)由上海市胸科医院提供，均培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中。
鼠抗人胃癌单克隆抗体(MGb2)(IgG1亚型)由本室制备，含MGb2单抗的BALB/c小鼠腹水经50%(NH4)2SO4盐析及二乙基胺基乙基纤维素离子交换层析得到纯化的IgG。
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二、方法
1. 免疫结合物的制备[3]：葡聚糖T-40 200mg与55mg高碘酸钠溶于40ml蒸镏水中室温下搅伴反应4小时，反应混合物对蒸镏水充分透析得到多醛基葡聚糖(PAD)。对PBS 30%聚乙二醇(分子量20000)0.02mol/L(pH7.4)反透析浓缩至浓度30mg/ml。60mgPAD与1.6mlMGb2(20mg)相混合，4°C反应24小时后于反应混合物中加入12mg MMC(溶于3mlPBS中)继续反应24小时，于其中加入0.3ml硼氢化钠PBS溶液(1mg/ml)2小时后反应混合物通过Sephadex G-200得到与胃癌细胞选择性作用的特异性结合物(MGb2-PAD-MMC)。结合物中MMC浓度根据其在363nm的克分子消光系数为23000计算，抗体浓度系采用改良的Lowry法测定，通过计算MMC和抗体两者克分子浓度的比值求得每一抗体分子中引入的MMC分子数目。
, http://www.100md.com 采用同一方法制备正常鼠IgG-PAD-MMC(无关抗体结合物)。
2. 结合物中抗体活性的检测：采用间接ELISA法检测。人胃癌细胞SGC-7901加至40孔培养液(2×104/孔)，二氧化碳培养箱中培养24小时后以0.25%戊二醛固定，于每孔加入0.1ml不同浓度结合物及游离抗体，37°C反应1小时后于每孔加入辣根过氧化物酶标记兔抗鼠Ig抗体，1小时后加底物显色，测定每孔495nm外光密度值。
3. 细胞毒性试验：以SGC-7901作为靶细胞、SL7作为非靶细胞，采用噻唑蓝活细胞染色法[4]检测特异性结合物对肿瘤靶细胞和非靶细胞的杀伤作用，并与游离MMC及无关抗体结合物比较。
4. 免疫结合物的放射性碘标记：MGb2-PAD-MMC结合物的放射性碘标记系采用氯胺T法，通过SephadexG-25除去游离125I，标记免疫结合物(125I-MGb2-PAD-MMC)的比活性为3.4μCi/μg蛋白，标记率为45%。采用同一方法对无关抗体结合物进行125I标记。
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5. 免疫显像及生物学分布研究：6只荷人胃癌SGC-7901(皮下型)Swiss裸小鼠分为两组，每组3只分别腹腔给予125I-MGb2-PAD-MMC及125I-正常鼠IgG-PAD-MMC(10μCi/只)，96小时后行ECT显像，之后活杀裸小鼠，取肿瘤、全血、心、肺、肝、脾、肾及胃等脏器，称重、测每分钟放射性计数值(cpm)，计算肿瘤、全血及各组织器官的放射性比度(cpm/mg)，求得肿瘤组织与非肿瘤组织放射性比度比值(T/NT)。
6. 移植瘤肾包膜下的接种及其生长曲线的确定：参照文献[5，6]方法分别将一块瘤组织(1～2mm3)接种在10只裸小鼠两侧肾包膜下，于第2、4、8、9、10天各处死2只小鼠，测量瘤径大小，计算瘤径净增值。
7. 体内治疗试验(双侧肾包膜下法)：在瘤组织接种后6小时于各治疗组裸鼠腹腔分别注射下述药物：(1)MGb2-PAD-MMC，其中MMC为1mg/kg、MGb210mg/kg；(2)MMClmg/kg；(3)MGb2-MMC，10mg/kg+1mg/kg；(4)MGb210mg/kg；(5)正常鼠IgG-PAD-MMC，其中MMC用量为1mg/kg；(6)对照组：生理盐水0.2ml只。每日给药1次，持续6天。瘤组织接种后第8天活杀裸小鼠，取出肾脏测量最终肿瘤组织块大小，通过治疗前后瘤径大小的变化判断待测物质体内抗肿瘤作用。
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结 果
一、结合物制备及抗体活性检测结果
通过葡聚糖中介体将MMC与MGb2相交联，每一抗体分子中可引入20个分子MMC。ELISA检测结果表明，在结合物制备过程中抗体活性较好地得以保存，稀释至3nmol/L水平，仍能较好地与肿瘤靶细胞相结合，其活性与未修饰抗体相接近。
二、免疫结合物的细胞毒性作用
MGb2-PAD-MMC、MMC及正常鼠IgG-PAD-MMC对靶细胞及非靶细胞的48小时杀伤作用如图1所示，可以看出，MGb2-PAD-MMC对肿瘤靶细胞的杀伤作用与游离MMC相近(P〉0.05)，但显著优于正常鼠IgG-PAD-MMC(P〈0.05)；与游离MMC相比较，MGb2-PAD-MMC对非靶细胞作用很弱，其作用与正常鼠IgG-PAD-MMC相近(P〉0.05)。
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(浓度μg/ml)
图1 ▲代表MGb2-PAD-MMC，Δ代表MMC，×代表正常鼠IgG-PAD-MMC A：人胃癌细胞系SGC-7901，B：正常人胚肺细胞系(SL7)
三、免疫结合物在荷人胃癌裸鼠体内肿瘤组织定位作用
免疫结合物被肿瘤组织选择性摄取，肿瘤组织比放射性强度明显高于非肿瘤组织，优于无关抗体结合物(表1)。ECT显像结果与生物学分布结果相一致，给予125I-MGb2-PAD-MMC后，肿瘤组织可以被清晰地显示出来，而125I-正常鼠IgG-APD-MMC显示阴性结果(图2a，2b)。
表1 125I-MGb2-PAD-MMC及125I-正常鼠IgG-PAD-MMC
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在荷人胃癌移植物SGC-7901裸鼠体内生物学分布(
±S) 组织T/NT
MGb2-PAD-MMC
正常鼠IgG-PAD-MMC
血
0.79±0.03
0.19±0.013Δ
心
2.63±0.72
0.83±0.240*
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肺
1.65±0.14
0.34±0.100*
肝
3.46±0.58
1.02±0.270*
腺
3.46±0.71
0.93±0.210*
肾
4.11±0.88
0.86±0.190*
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胃
5.50±1.38
1.31±0.320*
* P〈0.05 ΔP〈0.01
图2a 正常鼠给予125I-MGb2-PAD-MMC显示阴性结果
图2b 裸鼠给予125I-MGb2-PAD-MMC后肿瘤组织显示出来
四、移植瘤SGC-7901生长曲线
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瘤组织在两侧肾包膜下生长速度相近，在接种后第8天瘤径增长值为接种时瘤径的3～4倍(图3)。对接种后第10天瘤组织行组织学检查未见炎性细胞浸润、水肿、坏死等现象(图4)。根据SGC-7901的生长特点，确定了第8天为治疗试验后小鼠解剖时间。
图3 SGC-7901移植瘤生长曲线
图4 接种于裸小鼠肾包膜下人胃癌移植SGC-7901第10天的组织学形态 HE×600
五、免疫结合物对胃癌SGC-7901移植瘤体内生长的抑制作用
MGb2-PAD-MMC、MMC及MGb2+MMC混合物对肿瘤组织有显著抑制作用，其中以MGb2-PAD-MMC疗效最佳，优于MMC及MGb2+MMC混合物，单纯将MGb2与MMC混合无抗肿瘤的协同作用(表2)。
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表2 胃癌单抗MGb2-PAD-MMC结合物对胃癌移植瘤SGC-7901生长抑制作用(
±S) 组别肾个数
平均瘤径(omu)
治疗前后移植瘤
瘤径改变(omu)
抑制率
(%)
治疗前
治疗后
(1)MGb2-PAD-MMC
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8
12.3±1.6
23.1±5.8
10.9±4.7
68.67*Δ
(2)MMC
8
11.9±1.2
31.1±3.6
18.9±3.4
45.73*
(3)MGb+MMC
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8
13.0±1.1
29.9±1.8
16.9±1.8
51.60*
(4)MGb2
8
12.6±0.6
39.9±2.9
27.3±2.4
21.30
(5)正常鼠IgG-PAD-MMC
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8
11.0±0.9
37.9±3.8
26.9±4.3
22.45
(6)对照组
14
11.8±1.0
46.6±8.4
34.7±8.1
—
注：omu体视测量单位 *与对照组比较P〈0.01 Δ与(3)比较P〈0.01讨 论
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丝裂霉素C为抗生素类抗癌药物，广泛用于慢性白血病及胃癌、结肠癌等实体瘤的治疗。然而，由于毒性作用于，其临床应用受到限制克服这一不足的可行措施是将其与抗肿瘤单克隆抗体相交联对肿瘤组织选择性发挥其毒性作用。我们曾选择活性酯法制备鼠抗人胃癌单克隆抗体MGb2-MMC结合物，每个抗体分子中可引入4～5个分子MMC，得到的免疫结合物对肿瘤靶细胞显蒜选择性杀伤作用。为提高每个抗体分子中引入的药物分子数目且保持抗体活性，我们选择葡聚T-40作为中介体制备抗体-药物结合物，采用本方法，每个抗体分子中引入的药物分子数目增加至20个且抗体活性保存良好，结合物对肿瘤靶细胞也显示较强的选择性杀伤作用。免疫显像及生物学分布研究结果表明，抗体通过葡聚糖中介体与药物连结后，其体骨肿瘤组织定位能力无明显改变。
免疫结合物体内抗肿瘤活性的检测是十分重要的，并非体外有效的免疫结合物都能显示一定的体内治疗作用。有报道采用肿瘤皮下或腹水型模型来评价结合物体内抗肿瘤作用[7]。我们选择肾包膜下法测定MGb2-PAD-MMC体内对SGC-7901肿瘤移植物生长的抑制作用，由于肾包膜血运丰富，肿瘤移植物生长相对较快且待检物质较易到达肿瘤组织，缩短了试验所需时间。我们将瘤组织接种在裸小鼠双侧肾包膜下以评价结合物疗效。与单侧肾包膜下法相比较，双侧肾包膜下接种方法在技术上复杂些，但其优点是可在同一个体中获得两个样本数据，节省用鼠数。张素胤等[6]曾将多种人癌移植瘤单侧肾包膜下和双侧肾包膜下接种体内增长速度作一比较，未见明显差异。我们体内治疗试验结果表明，单独应用MMC对肿瘤生长有一定抑制作用，但如将MMC与抗肿瘤的单克隆抗体连接后其作用显著增强，如果延长给药间歇、减少给药次数，则结合物与游离药物体内疗效的差别可望增大，目前我们正深入进行这方面的研究。
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参考文献
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(1989年11月6日收稿 1990年4月26日修回), 百拇医药