肝细胞癌转铁蛋白受体表达的免疫组化研究*
作者：林菊生 李绍白 王家(马龙) 过晋源
单位：同济医科大学肝病研究所**，同济医科大学附属同济医院内科
关键词：肝肿瘤；转铁蛋白；受体,抗原；免疫组织化学
摘要 用转铁蛋白受体 摘要 用转铁蛋白受体(TFR)单克隆抗体WuT9和OKT9,以亲和素生物素过氧化物酶结合物(ABC)方法,对30例肝细胞癌(HCC)组织和6例正常人各器官组织TFR的表达作了研究.结果表明,肝癌细胞表达大量的TFR,而癌周间质细胞则不表达.表现为癌巢深染棕色,癌周间质免疫染色阴性.30例HCC血清甲胎蛋白(AFP)阳性22例,而TFR检测全部阳性.正常人体内,仅在有限部位表达少量,血中无游离抗原.从而提示,TFR作为HCC的一种结构抗原,其表达具有比AFP更高的相对特异性,TFR可以作为HCC的肿瘤抗原标记物和导向治疗的靶.
, http://www.100md.com
已经证实,细胞膜转铁蛋白受体(TFR)的表达,与细胞的增殖状态和对铁的需要密切相关。[1]当肿瘤细胞增殖时，对铁的需要大大增加,TFR的表达也随着大大增加.因此,TFR可以视为癌细胞膜的一种标记物[2],而作为治疗癌的潜在的靶[1,3].TFR在肝细胞癌(HCC)组织中表达的相对特异性程度如何?TFR能否作为HCC的肿瘤标记物和导向治疗的靶?为了探讨这一问题,我们应用TFR单抗,以亲和素生物素过氧化物酶结合物(Avidin Biotin peroxidase Complex;ABC)方法,对HCC组织和正常人各器官组织TFR的表达作如下研究.
材料与方法
一.组织标本来源与切片的制备
30例HCC组织标本来自我院外科手术病人,并经病理检查证实.正常粉体组织标本,包括心,肝,脾,肺,胰腺,肾上腺,食管,胃,十二指肠,大肠,皮肤,睾丸等来自6例突然意外死亡的健康年轻人.胎盘来自首胎正常分娩的健康产妇.
, 百拇医药
以上标本均在离体或死亡后半小时内,骤冻于以液氮预冷的异戊烷中,标本置恒冷切片机中,切成5um和切片.于冷丙酮中固定10分钟,经PBS洗涤,吹干后置-20℃冰箱备用,一式两份,分别作HE和ABC染色.
正常人外周血和骨髓来自献血员,制成涂片后,处理同冰冻切片.
二.主要试剂
TFR单抗WuT9和非特异性对照单抗HK均由卫生部武汉生物制品研究所免疫研究室提供.OKT9购自美国Ortho Raritan,NJ.ABC试剂盒(PK-4002)购自Vectastain公司.DAB购自Sigma化学试剂公司。
三,ABC免疫染色步骤参照药盒规定。
四.血清甲胎蛋白(AFP)测定按放射免疫测定法。
, http://www.100md.com
结果
一.HCC TFR免疫染色结果
30例HCC,血清AFP阳性22例,而TFR免疫染色均呈阳性.癌巢深染棕色,周围间质免疫染色阴性,棕色物质分布于胞膜,更多地分布在胞浆中。
二.正常人各器官组织TFR检测结果在所有检测的正常人各器官组织中,仅部分肝细胞,十二指肠粘膜上皮微绒毛,表皮基层,睾丸细精管,胰腺的Langerhans岛,胎盘绒毛膜合胞体滋养层,骨髓早期红细胞免疫染色阳性,而其他部位或细胞,包括心,肺,脾,肾上腺等重要脏器,以及血液和骨髓的其他细胞免疫染色阴性.而且,在以上阳性部位,除了胎盘外,染色程度均明显低于肝癌组织。
讨论
一.TFR作为HCC肿瘤标记物的可行性
, 百拇医药 众所周知,一种物质能否作为肿瘤的抗原标记物,取决于它在肿瘤细胞表达的相对特异性程度.本实验结果表明,肝癌细胞表达大量的TFR,而周围间质细胞则不表达,表现为癌巢深染棕色,周围间质免疫染色阴性.30例HCC,包括血清AFP阴性病例,TFR全部阳性.正常人体内,仅在有限部位表达少量,而其他重要脏器组织和细胞则不表达.由此可见,TFR在HCC组织中的表达,具有比AFP更高的相对特异性,TFR可以视为HCC的一种肿瘤抗原标记物.
二.TFR作为HCC导向治疗靶的可行性
作为肿瘤抗原标记物者,并非都是理想的导向治疗的靶.肿瘤抗原分为分泌型抗原和结构抗原两类.迄今,HCC的抗体导向研究大多针对AFP,Ferritin和HBsAg等分泌型抗原.由于其存在于HCC患者的血中,能增加血液本底和阻断抗体载体对肿瘤细胞的靶向性,从而影响放射免疫显像诊断和导向治疗的效果[4，5].本实验结果表明,TFR在HCC中的表达不仅表现出高度的相对特异性,而且不存在于血中.因此,TFR是HCC导向治疗的一种较理想的靶抗原.
, 百拇医药
图1 肝细胞癌巢深染棕色,示表达大量的转铁蛋白受体ABC×100
图2 正常人心脏免疫染色阴性,示不表达转铁蛋白受体ABC×100
参考文献
1.Lombard M,et al .Optimizing the immunohistochemical signal from the transferrin receptor in liver tissue ,Histochem J 1989;21:223
2.任顺林，等.人恶性肿瘤细胞的运铁蛋白受体.肿瘤1987；7：200
3.Trowbridge IS .Transferrin receptor as a potential therapeutic target .Prog -Allergy 1988;45:121
, http://www.100md.com
4.Pimm MV,et al .The characteristicas of blood-borne radiolabels and the effect o fanti-mouse IgG antibokies on localization of radiolabeled monoclonal antibody in cancer patients .J Nucl Med 1985;26:1011
5.Hnatowich DJ,et al .Pharmacokinetics of an indium-111-labeled monclonal natibody in cancer patients .J Nucl Me d1985;26:849
*国家自然科学基金资助课题
*武汉，邮政编码430030, http://www.100md.com
单位：同济医科大学肝病研究所**，同济医科大学附属同济医院内科
关键词：肝肿瘤；转铁蛋白；受体,抗原；免疫组织化学
摘要 用转铁蛋白受体 摘要 用转铁蛋白受体(TFR)单克隆抗体WuT9和OKT9,以亲和素生物素过氧化物酶结合物(ABC)方法,对30例肝细胞癌(HCC)组织和6例正常人各器官组织TFR的表达作了研究.结果表明,肝癌细胞表达大量的TFR,而癌周间质细胞则不表达.表现为癌巢深染棕色,癌周间质免疫染色阴性.30例HCC血清甲胎蛋白(AFP)阳性22例,而TFR检测全部阳性.正常人体内,仅在有限部位表达少量,血中无游离抗原.从而提示,TFR作为HCC的一种结构抗原,其表达具有比AFP更高的相对特异性,TFR可以作为HCC的肿瘤抗原标记物和导向治疗的靶.
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已经证实,细胞膜转铁蛋白受体(TFR)的表达,与细胞的增殖状态和对铁的需要密切相关。[1]当肿瘤细胞增殖时，对铁的需要大大增加,TFR的表达也随着大大增加.因此,TFR可以视为癌细胞膜的一种标记物[2],而作为治疗癌的潜在的靶[1,3].TFR在肝细胞癌(HCC)组织中表达的相对特异性程度如何?TFR能否作为HCC的肿瘤标记物和导向治疗的靶?为了探讨这一问题,我们应用TFR单抗,以亲和素生物素过氧化物酶结合物(Avidin Biotin peroxidase Complex;ABC)方法,对HCC组织和正常人各器官组织TFR的表达作如下研究.
材料与方法
一.组织标本来源与切片的制备
30例HCC组织标本来自我院外科手术病人,并经病理检查证实.正常粉体组织标本,包括心,肝,脾,肺,胰腺,肾上腺,食管,胃,十二指肠,大肠,皮肤,睾丸等来自6例突然意外死亡的健康年轻人.胎盘来自首胎正常分娩的健康产妇.
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以上标本均在离体或死亡后半小时内,骤冻于以液氮预冷的异戊烷中,标本置恒冷切片机中,切成5um和切片.于冷丙酮中固定10分钟,经PBS洗涤,吹干后置-20℃冰箱备用,一式两份,分别作HE和ABC染色.
正常人外周血和骨髓来自献血员,制成涂片后,处理同冰冻切片.
二.主要试剂
TFR单抗WuT9和非特异性对照单抗HK均由卫生部武汉生物制品研究所免疫研究室提供.OKT9购自美国Ortho Raritan,NJ.ABC试剂盒(PK-4002)购自Vectastain公司.DAB购自Sigma化学试剂公司。
三,ABC免疫染色步骤参照药盒规定。
四.血清甲胎蛋白(AFP)测定按放射免疫测定法。
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结果
一.HCC TFR免疫染色结果
30例HCC,血清AFP阳性22例,而TFR免疫染色均呈阳性.癌巢深染棕色,周围间质免疫染色阴性,棕色物质分布于胞膜,更多地分布在胞浆中。
二.正常人各器官组织TFR检测结果在所有检测的正常人各器官组织中,仅部分肝细胞,十二指肠粘膜上皮微绒毛,表皮基层,睾丸细精管,胰腺的Langerhans岛,胎盘绒毛膜合胞体滋养层,骨髓早期红细胞免疫染色阳性,而其他部位或细胞,包括心,肺,脾,肾上腺等重要脏器,以及血液和骨髓的其他细胞免疫染色阴性.而且,在以上阳性部位,除了胎盘外,染色程度均明显低于肝癌组织。
讨论
一.TFR作为HCC肿瘤标记物的可行性
, 百拇医药 众所周知,一种物质能否作为肿瘤的抗原标记物,取决于它在肿瘤细胞表达的相对特异性程度.本实验结果表明,肝癌细胞表达大量的TFR,而周围间质细胞则不表达,表现为癌巢深染棕色,周围间质免疫染色阴性.30例HCC,包括血清AFP阴性病例,TFR全部阳性.正常人体内,仅在有限部位表达少量,而其他重要脏器组织和细胞则不表达.由此可见,TFR在HCC组织中的表达,具有比AFP更高的相对特异性,TFR可以视为HCC的一种肿瘤抗原标记物.
二.TFR作为HCC导向治疗靶的可行性
作为肿瘤抗原标记物者,并非都是理想的导向治疗的靶.肿瘤抗原分为分泌型抗原和结构抗原两类.迄今,HCC的抗体导向研究大多针对AFP,Ferritin和HBsAg等分泌型抗原.由于其存在于HCC患者的血中,能增加血液本底和阻断抗体载体对肿瘤细胞的靶向性,从而影响放射免疫显像诊断和导向治疗的效果[4，5].本实验结果表明,TFR在HCC中的表达不仅表现出高度的相对特异性,而且不存在于血中.因此,TFR是HCC导向治疗的一种较理想的靶抗原.
, 百拇医药
图1 肝细胞癌巢深染棕色,示表达大量的转铁蛋白受体ABC×100
图2 正常人心脏免疫染色阴性,示不表达转铁蛋白受体ABC×100
参考文献
1.Lombard M,et al .Optimizing the immunohistochemical signal from the transferrin receptor in liver tissue ,Histochem J 1989;21:223
2.任顺林，等.人恶性肿瘤细胞的运铁蛋白受体.肿瘤1987；7：200
3.Trowbridge IS .Transferrin receptor as a potential therapeutic target .Prog -Allergy 1988;45:121
, http://www.100md.com
4.Pimm MV,et al .The characteristicas of blood-borne radiolabels and the effect o fanti-mouse IgG antibokies on localization of radiolabeled monoclonal antibody in cancer patients .J Nucl Med 1985;26:1011
5.Hnatowich DJ,et al .Pharmacokinetics of an indium-111-labeled monclonal natibody in cancer patients .J Nucl Me d1985;26:849
*国家自然科学基金资助课题
*武汉，邮政编码430030, http://www.100md.com