综合法制作大鼠萎缩性胃炎模型的实验研究
作者：李兆申 全山丛 许国铭 王世祥
单位：第二军医大学附属长海医院*
关键词：胃炎，萎缩性；动物，实验
摘要 采用对大鼠主动免疫2次和胆法及热水灌胃连续70天的综合方法 摘要 采用对大鼠主动免疫2次和胆法及热水灌胃连续70天的综合方法,制作成大鼠萎缩性胃炎模型.模型组鼠体重、胃粘膜pH值、胃粘膜血流量和电位差、病理改变(粘膜变薄,腺体减少,炎细胞浸润和肠腺化生)，与正常组比较，均差异有非常显著意义(p<0.01)，制模结束后继续喂养活45天，模型组鼠以上指标与正常组比较，仍均有显著或非常显著差异(P<0.05或P<0.01).本法制作的大鼠萎缩性胃炎模型适用于药物的疗效观察.
慢性萎缩性胃炎，(Chronic Atrophic Gastritis,简称CAG)是一种常见的危害人们身体健康的疾病.近年来研究表明，它与胃癌的发生有十分密切的关系.实验性萎缩性胃炎的研究，是慢性萎缩性胃炎研究的重要课题.尽管制作萎缩性胃炎动物模型的方法较多[1-3]，但成功率均不令人满意.我们根据目前公认的综合性病因[2]，对以往动物模型制作方法作了改良，采用主动免疫和胆法及热水灌胃同时进行的综合方法，获得了较满意的效果，现报告如下：
, 百拇医药
材料和方法
一、动物及分组
健康雄性SD大鼠(体重200-250g)40只，按体重随机分成4组：模型I组、模型II组、正常I组和正常II组.每组各10只，分笼喂养，每笼5只.
二、实验方法
1、模型I组、模型II组：采用同时进行主动免疫和胆法及热水灌胃的综合方法，制作大鼠萎缩性胃炎模型.(1)主动免疫：按参考文献[1-3]介绍的方法，每只大鼠皮下注射佐剂抗原(用同种大鼠胃粘膜的生理盐水的组织匀浆与Freund佐剂以1:1配成的乳剂)0.3ml,1个月后重复注射1次.(2)胆法灌胃:在做主动免疫的同时,采用无化脓性炎症病人的引流的胆法,按12。5ml/kg给大鼠灌胃(灌胃前4小时停食，自由饮水),每天1次,连续70天.(3)热水灌胃:在用胆法灌胃的同天(与胆汁灌胃间隔5小时0,用50.c热水12.5ml/kg灌胃,每天1次,连续70天.
, 百拇医药
2.正常I组、正常II组：生理盐水12.5ml/kg灌胃，每天2次(与模型I组，模型II组灌胃时间同步)，连续70天.
3.以上4组灌胃结束(共70天)后第2天,模型I组,正常I组大鼠麻醉(戌巴比妥纳，40mg/kg,腹腔内注射)状态下剖胃,测定大鼠腺胃粘膜pH,胃粘膜血流量,胃粘膜电位差,然后取材,切片做病理观察.模型II组,正常II组大鼠继续喂养45天,同模型I组,正常I组方法进行处理.
三.观察指标
1.一般情况:动物精神状态,活动情况,毛发光泽度及食欲.
2.体重:1次/周.
3.胃粘膜pH:采用微玻璃pH电极直接测定法.
4.胃粘膜血流量:采用激光多普勒血流计法.
, 百拇医药
5.胃粘膜电位差:采用Ag-AgC1电极直接测定法.
6.组织学改变:胃粘膜厚度,腺体,炎细胞浸润及肠腺化生情况.
结果
一.一般情况:2个正常组均优于2个模型组.模型I组在第30,35天各死亡1只模型II组在第35天死亡1只.
二.体重变化(图1)
一.一正常I组 --正常II组
一..一模型II组--模型II组
, 百拇医药
图1各组大鼠体重(均值)变化
模型I组,模型II组大鼠体重增长逐渐减慢,在第10周时,与正常I组,正常II组比较,差异均有显著意义(P<0.01).在灌胃结束后的继续喂养过程中,模型II组大鼠体重明显低于正常II组(P<0.01).
三.胃粘膜pH,血流量,电位差值的变化见表1.
表1 各组大鼠胃粘膜pH,血流量,电位差的比较(
s)
组别
鼠数
pH
, 百拇医药
血流量(v)
电位差(mv)
模型I组
8
5.7±0.9*
3.1±0.7*
0.2±6.8*
正常I组
10
3.6±0.6
5.0±0.7
19.7±5.7
, 百拇医药 模型II组
9
5.1±0.8Δ
3.9±0.5Δ
12.2±5.9ΔΔ
正常II组
10
3.6±0.7
5.1±0.6
19.9±6.4
注:模型I组.正常I组为灌胃70天时的胃粘膜变化,模型II组,正常II组为灌胃结束后继续喂养45天时的胃粘膜变化(表2同)
, 百拇医药
*与正常I组比较,P<0.01,Δ与正常II组比较，P〈0.01，ΔΔ与正常II组比较，P〈0.05
四.组织学改变
正常I组,正常II组鼠多为正常胃粘膜,个别有炎细胞浸润,模型I组,模型II组大鼠均有胃粘膜变薄,腺体减少,炎细胞浸润和肠腺化生(图2-7)等病理改变.各组组织学改变例数见表2.
表2 各组大鼠的胃组织学变化
组别
鼠数
粘膜变薄
腺体减少
炎细胞浸润
, http://www.100md.com 肠腺化生
模型I组
8
7*
8*
8*
6*
正常I组
10
0
0
2
0
模型II组
, 百拇医药
9
7Δ
7Δ
6ΔΔ
5ΔΔ
正常II组
10
0
0
1
0
*与正常I组比较P<0.01;与正常II组比较ΔP<0.01,ΔΔP<0.05讨论
慢性萎缩性胃炎的病因错综复杂,至今尚未完全明了.目前公认的因素是综合性的,如胃粘膜的慢性刺激,慢性酒精中毒,胆法返流,自体免疫等[1-3].临床病理变化主要为胃粘膜腺体广泛性破坏,粘膜变薄,淋巴细胞,浆细胞等的浸润,肠腺化生及假性幽门腺化生,甚至出现不典型增生及间变,导致胃粘膜屏障功能低下,胃粘膜血流量下降和沁酸减少.
, http://www.100md.com
我们对大鼠采用主动免疫2次,同时胆法及热水灌胃连续70天的综合方法,制成大鼠萎缩性胃炎模型.模型I组大鼠在第10周时,体重明显低于正常I组;胃粘膜PH明显升高,胃粘膜血流量,电位差明显降低,病理改变的发生例数均明显高于正常I组.模型II组大鼠在制模方法结束后继续喂养45天,其体重明显低于正常II组,胃粘膜pH明显高于正常II组,GMBF和PD均明显低于正常II组,病理改变的发生例数均明显高于正常II组,说明该方法制作的大鼠萎缩性胃炎模型较稳定,适用于药物的疗效观察.
图2 正常I组大鼠正常胃粘膜 HE×100 图3 正常II组大鼠正常胃粘膜HE×100 图4模型I组大鼠胃粘膜变薄,腺体减少HE×100 图5模型II组大鼠腺体减少,炎细胞浸润 HE×100 图6 模型I组大鼠胃粘膜腺体减少,炎细胞浸润滑HE×400 图7模型II组大鼠胃粘膜炎细胞浸润,肠腺化生 HE×100
, 百拇医药
参考文献
1.徐光炜主编.胃癌.北京:人民卫生出版社,1987:300
2.畔柳武雄,他.免疫学からみた消化管疾患.东京:株式会社医学书院,1974:128
3.Fumil H,et ,al.Effect of experimental immune atrophic gastrtitis on the induction of gastric carcinoma by X-irradiation in ICR mine.Jpn J Cancer Res 1976;67:335.
4.李兆申,等.大鼠胃粘膜血流量与泌酸关系.第二军医大学学报 1988;9:514
5.李兆申,等.内镜下测定胃粘膜区域电位.内镜1990;7:156
*上海,邮政编码200433, http://www.100md.com
单位：第二军医大学附属长海医院*
关键词：胃炎，萎缩性；动物，实验
摘要 采用对大鼠主动免疫2次和胆法及热水灌胃连续70天的综合方法 摘要 采用对大鼠主动免疫2次和胆法及热水灌胃连续70天的综合方法,制作成大鼠萎缩性胃炎模型.模型组鼠体重、胃粘膜pH值、胃粘膜血流量和电位差、病理改变(粘膜变薄,腺体减少,炎细胞浸润和肠腺化生)，与正常组比较，均差异有非常显著意义(p<0.01)，制模结束后继续喂养活45天，模型组鼠以上指标与正常组比较，仍均有显著或非常显著差异(P<0.05或P<0.01).本法制作的大鼠萎缩性胃炎模型适用于药物的疗效观察.
慢性萎缩性胃炎，(Chronic Atrophic Gastritis,简称CAG)是一种常见的危害人们身体健康的疾病.近年来研究表明，它与胃癌的发生有十分密切的关系.实验性萎缩性胃炎的研究，是慢性萎缩性胃炎研究的重要课题.尽管制作萎缩性胃炎动物模型的方法较多[1-3]，但成功率均不令人满意.我们根据目前公认的综合性病因[2]，对以往动物模型制作方法作了改良，采用主动免疫和胆法及热水灌胃同时进行的综合方法，获得了较满意的效果，现报告如下：
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材料和方法
一、动物及分组
健康雄性SD大鼠(体重200-250g)40只，按体重随机分成4组：模型I组、模型II组、正常I组和正常II组.每组各10只，分笼喂养，每笼5只.
二、实验方法
1、模型I组、模型II组：采用同时进行主动免疫和胆法及热水灌胃的综合方法，制作大鼠萎缩性胃炎模型.(1)主动免疫：按参考文献[1-3]介绍的方法，每只大鼠皮下注射佐剂抗原(用同种大鼠胃粘膜的生理盐水的组织匀浆与Freund佐剂以1:1配成的乳剂)0.3ml,1个月后重复注射1次.(2)胆法灌胃:在做主动免疫的同时,采用无化脓性炎症病人的引流的胆法,按12。5ml/kg给大鼠灌胃(灌胃前4小时停食，自由饮水),每天1次,连续70天.(3)热水灌胃:在用胆法灌胃的同天(与胆汁灌胃间隔5小时0,用50.c热水12.5ml/kg灌胃,每天1次,连续70天.
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2.正常I组、正常II组：生理盐水12.5ml/kg灌胃，每天2次(与模型I组，模型II组灌胃时间同步)，连续70天.
3.以上4组灌胃结束(共70天)后第2天,模型I组,正常I组大鼠麻醉(戌巴比妥纳，40mg/kg,腹腔内注射)状态下剖胃,测定大鼠腺胃粘膜pH,胃粘膜血流量,胃粘膜电位差,然后取材,切片做病理观察.模型II组,正常II组大鼠继续喂养45天,同模型I组,正常I组方法进行处理.
三.观察指标
1.一般情况:动物精神状态,活动情况,毛发光泽度及食欲.
2.体重:1次/周.
3.胃粘膜pH:采用微玻璃pH电极直接测定法.
4.胃粘膜血流量:采用激光多普勒血流计法.
, 百拇医药
5.胃粘膜电位差:采用Ag-AgC1电极直接测定法.
6.组织学改变:胃粘膜厚度,腺体,炎细胞浸润及肠腺化生情况.
结果
一.一般情况:2个正常组均优于2个模型组.模型I组在第30,35天各死亡1只模型II组在第35天死亡1只.
二.体重变化(图1)
一.一正常I组 --正常II组
一..一模型II组--模型II组
, 百拇医药
图1各组大鼠体重(均值)变化
模型I组,模型II组大鼠体重增长逐渐减慢,在第10周时,与正常I组,正常II组比较,差异均有显著意义(P<0.01).在灌胃结束后的继续喂养过程中,模型II组大鼠体重明显低于正常II组(P<0.01).
三.胃粘膜pH,血流量,电位差值的变化见表1.
表1 各组大鼠胃粘膜pH,血流量,电位差的比较(
s)组别
鼠数
pH
, 百拇医药
血流量(v)
电位差(mv)
模型I组
8
5.7±0.9*
3.1±0.7*
0.2±6.8*
正常I组
10
3.6±0.6
5.0±0.7
19.7±5.7
, 百拇医药 模型II组
9
5.1±0.8Δ
3.9±0.5Δ
12.2±5.9ΔΔ
正常II组
10
3.6±0.7
5.1±0.6
19.9±6.4
注:模型I组.正常I组为灌胃70天时的胃粘膜变化,模型II组,正常II组为灌胃结束后继续喂养45天时的胃粘膜变化(表2同)
, 百拇医药
*与正常I组比较,P<0.01,Δ与正常II组比较，P〈0.01，ΔΔ与正常II组比较，P〈0.05
四.组织学改变
正常I组,正常II组鼠多为正常胃粘膜,个别有炎细胞浸润,模型I组,模型II组大鼠均有胃粘膜变薄,腺体减少,炎细胞浸润和肠腺化生(图2-7)等病理改变.各组组织学改变例数见表2.
表2 各组大鼠的胃组织学变化
组别
鼠数
粘膜变薄
腺体减少
炎细胞浸润
, http://www.100md.com 肠腺化生
模型I组
8
7*
8*
8*
6*
正常I组
10
0
0
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模型II组
, 百拇医药
9
7Δ
7Δ
6ΔΔ
5ΔΔ
正常II组
10
0
0
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0
*与正常I组比较P<0.01;与正常II组比较ΔP<0.01,ΔΔP<0.05讨论
慢性萎缩性胃炎的病因错综复杂,至今尚未完全明了.目前公认的因素是综合性的,如胃粘膜的慢性刺激,慢性酒精中毒,胆法返流,自体免疫等[1-3].临床病理变化主要为胃粘膜腺体广泛性破坏,粘膜变薄,淋巴细胞,浆细胞等的浸润,肠腺化生及假性幽门腺化生,甚至出现不典型增生及间变,导致胃粘膜屏障功能低下,胃粘膜血流量下降和沁酸减少.
, http://www.100md.com
我们对大鼠采用主动免疫2次,同时胆法及热水灌胃连续70天的综合方法,制成大鼠萎缩性胃炎模型.模型I组大鼠在第10周时,体重明显低于正常I组;胃粘膜PH明显升高,胃粘膜血流量,电位差明显降低,病理改变的发生例数均明显高于正常I组.模型II组大鼠在制模方法结束后继续喂养45天,其体重明显低于正常II组,胃粘膜pH明显高于正常II组,GMBF和PD均明显低于正常II组,病理改变的发生例数均明显高于正常II组,说明该方法制作的大鼠萎缩性胃炎模型较稳定,适用于药物的疗效观察.
图2 正常I组大鼠正常胃粘膜 HE×100 图3 正常II组大鼠正常胃粘膜HE×100 图4模型I组大鼠胃粘膜变薄,腺体减少HE×100 图5模型II组大鼠腺体减少,炎细胞浸润 HE×100 图6 模型I组大鼠胃粘膜腺体减少,炎细胞浸润滑HE×400 图7模型II组大鼠胃粘膜炎细胞浸润,肠腺化生 HE×100
, 百拇医药
参考文献
1.徐光炜主编.胃癌.北京:人民卫生出版社,1987:300
2.畔柳武雄,他.免疫学からみた消化管疾患.东京:株式会社医学书院,1974:128
3.Fumil H,et ,al.Effect of experimental immune atrophic gastrtitis on the induction of gastric carcinoma by X-irradiation in ICR mine.Jpn J Cancer Res 1976;67:335.
4.李兆申,等.大鼠胃粘膜血流量与泌酸关系.第二军医大学学报 1988;9:514
5.李兆申,等.内镜下测定胃粘膜区域电位.内镜1990;7:156
*上海,邮政编码200433, http://www.100md.com